豬痢疾短螺旋體的檢測(cè)、感染情況調(diào)查及免疫原性的初步研究.pdf

1、豬痢疾（Swinedysentery，SD）是由豬痢疾短螺旋體（Brachyspirahyosenteriae，B.hyo）引起的一種危害比較嚴(yán)重的腸道傳染病。主要致病部位在結(jié)腸，引起豬的粘液性、出血性下痢，嚴(yán)重時(shí)還可引起豬的死亡。豬痢疾短螺旋體兩端尖呈蛇形，長(zhǎng)約6μm～8.5μm，直徑為320～380nm，多為4～6個(gè)疏螺彎曲，為革蘭氏陰性菌，厭氧，對(duì)生長(zhǎng)條件較為苛刻，分離較為困難。該病是豬腸道綜合征的重要病原之一，造成豬的生長(zhǎng)緩慢、

2、飼料利用率低和成本增加，世界范圍廣泛流行，特別是發(fā)達(dá)國(guó)家，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。相比國(guó)外，國(guó)內(nèi)的相關(guān)研究還比較少，因此，有必要進(jìn)行其流行病學(xué)的調(diào)查和相關(guān)特性的研究。下面就從以下三個(gè)方面對(duì)本文的研究做個(gè)簡(jiǎn)要概括:
　　1.TaqMan-MGB實(shí)時(shí)熒光定量PCR快速檢測(cè)豬痢疾短螺旋體的研究
　　為了提高豬痢疾短螺旋體的陽(yáng)性檢測(cè)率，針對(duì)保守保守的NADHoxidase（nox）基因設(shè)計(jì)合成了一對(duì)引物和相應(yīng)的探針，經(jīng)過(guò)優(yōu)化方法和條件

3、，建立了TaqMan-MGB實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，并且通過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證了此方法具有高度特異性、高靈敏度及較好的重復(fù)性。用構(gòu)建的重組質(zhì)粒建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性相關(guān)系數(shù)為0.99，具有良好的線性關(guān)系，可以檢測(cè)最低為2.17個(gè)拷貝數(shù)的菌量，且沒(méi)有交叉反應(yīng)。對(duì)107份樣本DNA進(jìn)行檢測(cè)后，同普通PCR相比較，結(jié)果顯示該方法敏感、準(zhǔn)確。此外，相比普通方法，該方法還具有耗時(shí)短，可以準(zhǔn)確定量等特點(diǎn)，可以廣泛用于豬場(chǎng)屠宰場(chǎng)的豬痢疾的檢測(cè)和流行病學(xué)的調(diào)查。<

4、br>　　2.上海及周邊地區(qū)豬場(chǎng)豬痢疾短螺旋體病感染調(diào)查
　　為了更好地了解此病在各地豬場(chǎng)的感染情況和流行情況，自2010年10月份至2012年12月份從上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心門診室，上海地區(qū)的五個(gè)屠宰場(chǎng)以及上海、浙江、河南等地的規(guī)?；i場(chǎng)采集了豬結(jié)腸和糞便臨床樣本624份。利用所建立的方法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示不同癥狀、不同周齡的樣本，陽(yáng)性率也不同，其中腹瀉癥狀為15％，無(wú)腹瀉癥狀為1.93％，2～5周齡、6～9周齡、10～

5、13周齡、14～17周齡和18～19周齡的豬痢疾短螺旋體的陽(yáng)性檢出率分別為14％、22％、32％、13％、8.2％，屠宰場(chǎng)的陽(yáng)性率很低，所檢樣本平均感染率為8.49％。豬群中仔豬和育成豬的感染率較高。通過(guò)厭氧培養(yǎng)成功分離得到一株豬痢疾短螺旋體SH-BH-1。上海及其周邊地區(qū)豬痢疾感染情況的調(diào)查為今后防控此病有了可靠的依據(jù)。
　　3.豬痢疾短螺旋體外膜蛋白BlpA原核表達(dá)、純化與免疫原性分析
　　根據(jù)豬痢疾短螺旋體外膜蛋白Bl