副豬嗜血桿菌外膜囊泡的組分分析及免疫原性研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis，HPS)屬于巴斯德桿菌科、嗜血桿菌屬，為種多形性革蘭氏陰性短桿菌，多存在于豬上呼吸道，是種共棲菌。該菌可引起以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎為主要特征，有較高死亡率的豬格氏病。已鑒定出該菌有15個(gè)血清型，但還有部分菌株不能定型，且各菌株之間缺乏交叉免疫保護(hù)性，因此研發(fā)新型有效的副豬嗜血桿菌病疫苗已成為當(dāng)務(wù)之急。
　　外膜囊泡(Outer membrane vesicle，OMV

2、)是革蘭氏陰性菌生長(zhǎng)到穩(wěn)定階段后，外膜向外周環(huán)境中釋放的包括整個(gè)外膜上的相關(guān)蛋白和脂多糖(Lipopolysaeeharide，LPS)成分的微小囊泡，不僅是致病性病原菌的毒力因子之一，而且具有很好的免疫原性，是極具潛力的新型疫苗抗原。
　　副豬嗜血桿菌是革蘭氏陰性菌，但目前對(duì)其OMV了解甚少。為此，本研究開展了OMV主要組分及生物學(xué)特性初步研究。首先采用超速離心法提取血清5型HPS菌株OMV，通過(guò)密度梯度離心進(jìn)行純化， SDS-

3、PAGE實(shí)驗(yàn)分析其主要蛋白組分，同時(shí)與同種菌株包含的胞質(zhì)蛋白(CP)、周質(zhì)蛋白(PP)及外膜蛋白OMP進(jìn)行比較，并用BCA法測(cè)定OMV的蛋白含量;通過(guò)PicoGreen法定量OMV中DNA濃度;進(jìn)一步通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)研究其免疫原性和保護(hù)作用。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)純化的OMV做蛋白酶K處理，接種人喉癌上皮細(xì)胞，測(cè)定細(xì)胞上清中IL-8含量，初步研究OMV的免疫保護(hù)機(jī)制及分子基礎(chǔ)。
　　研究結(jié)果表明:(1)副豬嗜血桿菌OMV的主要蛋白成分與外