豬囊尾蚴TSOL18核酸疫苗表達載體構(gòu)建、免疫原性及安全性研究.pdf

1、囊蟲病(Cysticercosis)是由豬帶絳蟲(Taenia solium)的幼蟲豬囊尾蚴寄生于人或豬等中間宿主而引起的人畜共患寄生蟲病，在中國大部分地區(qū)廣泛流行，嚴(yán)重威脅著當(dāng)?shù)鼐用竦纳眢w健康，是一個重要的公共衛(wèi)生問題。不僅如此，該病也是制約養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要因素，還給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成重大經(jīng)濟損失，囊蟲病的廣泛存在還造成畜牧業(yè)的重大經(jīng)濟損失，極大影響了我國畜產(chǎn)品在國際市場上的競爭力，因而是公認(rèn)的社會經(jīng)濟病之一。 1.本實驗將豬帶絳

2、蟲六鉤蚴階段TSOL18基因定向克隆于真核表達質(zhì)粒pVAX1，經(jīng)篩選、鑒定及DNA序列分析正確后，將重組質(zhì)粒pVAX1/TSOL18轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞，通過SDS-PAGE、Western blotting、熒光抗體染色，檢測細(xì)胞中表達的TSOL18抗原。結(jié)果表明，重組真核質(zhì)粒pVAX1/TSOL18可在BHK-21細(xì)胞中表達，表達的TSOL18目的蛋白能被豬囊尾蚴病陽性血清所識別。動物免疫試驗表明，真核表達載體能有效地誘導(dǎo)機體產(chǎn)生細(xì)

3、胞免疫和體液免疫應(yīng)答，這為豬囊尾蚴病核酸疫苗的研究奠定了良好的基礎(chǔ)。 2.探討pVAX1/TSOL18重組表達質(zhì)粒作為DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的組織分布和生物安全性。將pVAX1/TSOL18重組質(zhì)粒經(jīng)肌肉注射免疫BALB/c小鼠，免疫后不同時間剖殺小鼠，分別采集各種組織樣品，抽提gDNA，利用PCR技術(shù)分析pVAX1/TSOL18在組織內(nèi)的分布及殘留時間；同時，以PCR技術(shù)檢測免疫動物糞便，分析pVAX1/TSOL18重組表達質(zhì)粒

4、在外界環(huán)境中的釋放情況。結(jié)果顯示，免疫pVAX1/TSOL18重組表達質(zhì)粒1d和5d后，在小鼠組織gDNA均擴增出目的片段，但不同個體的小鼠，擴增出的目的片段的組織也不完全相同，但在血液中均擴增出了目的片段，第5d較第1d擴增出的目的片段明顯變暗；免疫后15d，僅在一只小鼠的血液中檢測到TSOL18基因：免疫后30d在所有動物組織中均未檢測到重組表達質(zhì)粒；同時，免疫1d、5d小鼠的糞便中均未檢測到TSOL18基因。pVAX1/TSOL1