核酸疫苗免疫機(jī)制及安全性研究.pdf

1、核酸疫苗做為第三代疫苗不僅能夠誘導(dǎo)強(qiáng)的體液免疫同時可以誘導(dǎo)較好的細(xì)胞免疫相對于傳統(tǒng)疫苗有顯著優(yōu)勢,為乙型肝炎、囊蟲病等一系列感染性疾病的防治開辟了新的領(lǐng)域。然而在大量臨床實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)核算疫苗在大動物的免疫效果不佳及核酸疫苗的安全問題使得核酸疫苗的發(fā)展受到很大的制約。如何提高核酸疫苗的免疫原性、闡述核酸疫苗的免疫機(jī)制成為核酸疫苗發(fā)展的核心問題。 近年來隨著對核酸疫苗研究的深入,新的免疫劑型、免疫方案正在為核酸疫苗的發(fā)展帶來新的動力,

2、本課題通過一種新的免疫方案,微針注射輔以細(xì)胞因子Flt3L的策略來提高乙肝DNA疫苗的免疫效果。微針是在電子微電機(jī)的技術(shù)上發(fā)展的新技術(shù),將硅、化學(xué)聚合物等經(jīng)過氫氧話鉀腐蝕技術(shù)焊接到1平方厘米的芯片生產(chǎn)出來的聚合針列,其高度在50微米到200微米能夠有效穿透皮膚表層和角質(zhì)層到達(dá)活性表皮層,而皮膚尤其是活性表皮富含抗原提呈細(xì)胞,一直被認(rèn)為是高免疫活性部位,核酸疫苗的靶向給藥與表皮層,可以直接作用與抗原提呈細(xì)胞從而提高免疫效果。Flt3L一種

3、免疫刺激分子,能夠增強(qiáng)T細(xì)胞依賴性和T細(xì)胞非依賴性2種途徑的T細(xì)胞的增殖。此外Flt3L還能夠誘導(dǎo)重要的抗原提呈細(xì)胞DC的分泌和活化。從不同免疫組合中我們比較得到微針聯(lián)合Flt3L能夠明顯的增強(qiáng)疫苗的體液免疫和細(xì)胞免疫水平。本課題系統(tǒng)地考察了這種新的免疫方案的免疫效果,并探討了其增效的分子機(jī)制。結(jié)果表明微針聯(lián)合Flt3L注射能夠顯著增強(qiáng)DNA疫苗的免疫原性,增強(qiáng)疫苗免疫效果。 核酸疫苗誘導(dǎo)免疫效果得到大量的驗(yàn)證,但是其安全性和其

4、保護(hù)機(jī)制一直是核酸疫苗的核心問題未被闡明。以pVAX1、pCDNA3質(zhì)粒為載體構(gòu)建了表達(dá)AnnexinB1抗原的DNA疫苗,用pVAX-B1、pCDNA3-B1和B1蛋白苗以C57BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)動物實(shí)施了免疫。在檢測了小鼠的總抗體滴度、T細(xì)胞增殖的能力、CTL活性的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步進(jìn)行了比較脾臟蛋白質(zhì)組學(xué)的研究,以期能闡明疫苗安全性、免疫增效作用的機(jī)制。通過不同載體核酸疫苗的膠比較,我們發(fā)現(xiàn)pCDNA3-B1組小鼠有2個蛋白上調(diào)、3個