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1、目的:觀察體外誘導(dǎo)的自體白血病樹突狀細(xì)胞(1eukemic-dendriticcell,L-DC)疫苗體內(nèi)回輸?shù)陌踩裕ㄟ^對(duì)細(xì)胞因子和T細(xì)胞亞群的檢測(cè),來(lái)初步探討L-DC疫苗對(duì)機(jī)體免疫狀態(tài)的影響,以便指導(dǎo)進(jìn)一步的臨床研究。 方法:留取白血病患者未緩解骨髓分離單個(gè)核細(xì)胞在體外用常規(guī)聯(lián)合因子培養(yǎng)法(GM-CSF+IL-4+TNF-α)誘導(dǎo)制備L-DC疫苗,行流式細(xì)胞免疫表型檢測(cè)進(jìn)行細(xì)胞鑒定。在化療緩解后的間歇期,白血病患者接受體外
2、誘導(dǎo)的自體L-DC疫苗的靜脈回輸,每周一次,連續(xù)4次,為一個(gè)療程?;剌斊陂g及之后兩個(gè)月觀察疫苗輸注的臨床相關(guān)毒副反應(yīng)。留取患者疫苗第一次回輸前及回輸后24h外周血,低溫分離獲取血清,行流式小球微陣列術(shù)(cytokinebeadarray,CBA)分析血清中Th1/Th2細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和TNF-αt的濃度變化,另留取患者第一次疫苗輸注前及完成4次疫苗輸注后一周內(nèi)外周肝素抗凝血行多參數(shù)三色流式細(xì)
3、胞法(flowcytometricmethod,FCM)檢測(cè)T細(xì)胞亞群的表達(dá)變化。最后用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果:2003年12月~2005年10月共31例經(jīng)血液學(xué)確診為白血病的患者入組了本研究,其中20例完成了全部的細(xì)胞因子及T細(xì)胞亞群檢測(cè),可進(jìn)行評(píng)價(jià)。體外骨髓單個(gè)核細(xì)胞常規(guī)聯(lián)合因子培養(yǎng),成功誘導(dǎo)出自體L-DC疫苗,流式檢測(cè)高表達(dá)成熟DC的免疫表型HLA-ABC,HLA-DR、CD80、CDE86、CD83。
4、在化療間歇期順利進(jìn)行了疫苗的回輸,患者耐受性良好,臨床未觀察到明顯的不良反應(yīng)。第一次DC疫苗回輸前及回輸后24h比較,血清Th1/Th2因子濃度均升高,其中工L-2、IL-4、IL-6和IFN-γ升高顯著,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(統(tǒng)計(jì)量t值分別為-2.576、-2.033、-2.777、-2.053、P值分別為0.010、0.042、0.005、0.040)。疫苗回輸前后細(xì)胞因子差值比較出現(xiàn)TH1因子優(yōu)勢(shì)趨勢(shì)。T亞群分析顯示,CD4+細(xì)胞比率
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