重組人p53腺病毒轉(zhuǎn)染慢性粒細(xì)胞源性樹突狀細(xì)胞的抗白血病免疫效應(yīng)研究.pdf

1、目的：樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell，DC)是唯一能夠激活初始型T細(xì)胞的抗原呈遞細(xì)胞antigen presenting cell(APC)，是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答的樞紐，在識別腫瘤抗原，激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗在部分惡性腫瘤的治療中已顯示出良好的效果?；诎籽〖?xì)胞與DC分化起源的相似性，白血病細(xì)胞可誘導(dǎo)分化為DC(L-DCs)，從而為白血病的臨床治療開辟了一條嶄新的道路，L-DCs既能表達(dá)

2、白血病抗原，又能致敏T淋巴細(xì)胞特異性殺滅白血病細(xì)胞，消滅殘留白血病灶，防止白血病的復(fù)發(fā)，在白血病的免疫治療中發(fā)揮著重要作用。但有研究表明，白血病來源的DC與正常DC相比，其遷移、吞噬作用及抗原加工和細(xì)胞因子分泌等功能較弱，從而使其激發(fā)抗腫瘤免疫應(yīng)答能力下降。因此如何促進(jìn)L-DC成熟增強其功能在白血病細(xì)胞免疫研究和臨床治療中有著重要的理論和實踐意義。研究發(fā)現(xiàn)腺病毒P53修飾DC細(xì)胞可使其表達(dá)內(nèi)源性p53蛋白抗原，上調(diào)DC表面共刺激分子、從

3、而刺激有效的細(xì)胞免疫應(yīng)答，產(chǎn)生特異性抗腫瘤CTL效應(yīng)。因此我們設(shè)想通過轉(zhuǎn)染重組人P53腺病毒以促進(jìn)L-DC成熟，增強其抗原呈遞能力并使其內(nèi)原性腫瘤抗原表達(dá)增加，從而誘發(fā)強的抗白血病效應(yīng)。 方法：采集初治慢性粒細(xì)胞性白血病(CML)患者骨髓，分離單個核細(xì)胞(MNC)，應(yīng)用rhGM-CSF和rhIL-4先將CML-MNC誘導(dǎo)分化為不成熟DC(imDC)并分組：實驗組加TNF-a促使其成熟(mDC)，并按MOI為100:1加入重組人p

4、53腺病毒(rAd-p53)即(rAd-p53-CML-DC)，對照組加入腺病毒空載體LacZ(rAd-CML-DC)，空白對照組只加THF-a(N-CML-DC)。繼續(xù)培養(yǎng)72小時，流式細(xì)胞儀檢測DC免疫表型、酶聯(lián)免疫吸附法(EUSA)進(jìn)行上清夜IL-12水平測定，MTr法觀察CML-DCs刺激自體T淋巴細(xì)胞增殖能力(MLR)及針對K562細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用(CTL效應(yīng))。 結(jié)果：實驗組、對照組均成功獲得具有樹突狀突起的細(xì)胞，

5、但以實驗組樹突狀突起明顯。染色體檢查證實rAd-p53-CML-DC仍具有慢性粒細(xì)胞白血病來源的遺傳學(xué)特征。流式細(xì)胞檢測結(jié)果：實驗組與對照組其CD80、CD86、CD83、CDla、CD40和HLA-DR等表型明顯高于空白對照組(p<0.05)；上清液中ID1-2分泌水平rAd-p53-CML-DC為293.973±29.68pg/ml明顯高于對照組及空白對照組150.16±19.40pg/ml、114.31±13.13pg/ml(p<

6、0.05)；刺激自體淋巴細(xì)胞增殖的能力隨rAd-p53-CML-DC與淋巴細(xì)胞比例的增加而升高。對靶細(xì)胞的細(xì)胞毒作用(CTL效應(yīng))實驗結(jié)果顯示：在效靶比(E/T)為5:1、10:1和20:1時，實驗組(rAd-p53-CML-DC)所誘發(fā)的CTL活性均值分別為29.63±1.86％；40.45±2.24％；48.33±3.65％；對照組CML-DC(LacZ-CML-DC)為16.70±2.20％；18.22±1.81％；20.90-+

7、1.85％而空白對照組CML-DC(N-CML-DC組)誘發(fā)的CTL活性僅為16.57±3.43％；15.88±1.86％；16.94±2.43％實驗組(rAd-p53-CML-DC)介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷率顯著高于其他兩組(P<0.05)。 結(jié)論：利用rAd-p53轉(zhuǎn)染慢性粒細(xì)胞白血病源性樹突狀細(xì)胞，可促進(jìn)CML-DC成熟并增強CML-DC的功能，其介導(dǎo)的MLR及CTL效應(yīng)明顯強于非rAd-p53組合所誘導(dǎo)的DC。以rAd-p53-D