K562白血病株樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)及其抗腫瘤功能的體外研究.pdf

1、目的：本研究將：K562細(xì)胞誘導(dǎo)分化為DC,并以K562-DC作為刺激細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞毒 T 淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng)，觀察其體外特異性抗腫瘤效應(yīng)，對(duì)白血病細(xì)胞來源DC用于白血病免疫治療進(jìn)行初步探討。 方法： 1.應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)研究丙戊酸鈉(VPA)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)。 2.應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)丙戊酸鈉誘導(dǎo)K562細(xì)胞株細(xì)胞凋亡的作用。 3.丙戊酸鈉將K562細(xì)胞誘導(dǎo)分化為DC(K562-DC)。

2、 4．DC的鑒定：(1)形態(tài)學(xué)：倒置顯微鏡(Olvmpus)下觀察細(xì)胞形態(tài)并攝相。(2)免疫表型：PE結(jié)合的鼠抗人CD1a、HLA DR、CD83、CD80及CD86單抗用流式細(xì)胞儀分析檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志。(3)功能鑒定：采用同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。 5．MTT殺傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DC誘導(dǎo)特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的殺傷活性。 結(jié)果： 1．丙戊酸鈉(VPA)對(duì)K562細(xì)胞增殖表現(xiàn)出很明顯的抑制作用，且在0.1～100m

3、g/ml范圍內(nèi)增殖抑制作用有明顯的量效關(guān)系。 2．隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)，丙戊酸鈉(VPA)促腫瘤細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象越明顯，各時(shí)間段結(jié)果之間比較存在顯著性差異。 3．丙戊酸鈉(VPA)培養(yǎng)第7天時(shí)，細(xì)胞均勻分散，變形，體積增大，數(shù)量增多，細(xì)胞表面可見多個(gè)突起，且具有刺狀突起的細(xì)胞數(shù)量較前增多。 4．通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)的K562DC表面分子的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)丙戊酸鈉(VPA)誘導(dǎo)的。K562DC各表面標(biāo)志的表達(dá)，與K562

4、細(xì)胞相比均明顯上調(diào)。 5．丙戊酸鈉(VPA)誘導(dǎo)的 K562DC具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)CTL 殺傷腫瘤細(xì)胞的能力且隨效靶比例增高而增強(qiáng)，并顯著高于未負(fù)載腫瘤可溶性抗原的DC及單純T細(xì)胞組。 結(jié)論：以K562細(xì)胞為靶細(xì)胞，觀察VPA對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響和誘導(dǎo)凋亡、向樹突狀細(xì)胞分化作用。MTT法證實(shí)VPA對(duì)K562細(xì)胞具有增殖抑制作用，且作用具有顯著的濃度依賴性。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，高濃度劑量VPA對(duì)K562細(xì)胞增殖抑制的的機(jī)理