IL-21對CIK細胞抗白血病系K562細胞活性作用及其機制的研究.pdf

1、目的：觀察IL-21對CIK細胞增殖、分泌、細胞亞群比例、細胞因子mRNA量表達的變化，探討IL-21對CIK細胞抗白血病系K562細胞毒性作用及其機制的影響。
　　方法：抽取健康志愿者肝素抗凝的外周全血30ml，用Ficoll溶液提取出外周血單個核細胞，將該細胞置于3個不同的無菌培養(yǎng)瓶中，隨機設為對照組(加入IL-2100ng/ml，無IL-21)、IL-21組(加IL-21,不加IL-2)、IL-21+IL-2組(加IL-21

2、與IL-2)，用含有10％FBS1640培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，每天在倒置相位差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化，第0、7、10、14d用手工計數法計數細胞數量及計算出總數量；第14d分別收取每組培養(yǎng)瓶中的懸液，離心，取上清液，用ELISA法測定上清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10、TGF-β、IL-21量，收取細胞，用流式細胞術檢測CIK細胞亞群CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+、CD25+、CD4+CD25+比例，

3、用CCK-8檢測CIK細胞對白血病系K562細胞的毒性作用，用實時熒光定量PCR法檢測穿孔素、Granzyme A、Granzyme B、Fasl、NKG2D、IL-21R mRNA表達量的變化，用Western blot法檢測CIK細胞JAK-STAT中STAT1、STAT5a、TAT3和STAT5b信號通路的變化。
　　結果：CIK細胞培養(yǎng)至第5天開始，細胞體積略有增大，數量逐漸增多，第7、10d細胞數量明顯增多，IL-21組

4、、IL-21+IL-2組細胞數量變化較對照組無明顯差異(P＞0.05），第14d細胞體積明顯較大，數量顯著增加，IL-21組細胞數量明顯低于對照組，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），IL-21+IL-2組較對照組無明顯差異，無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）；CIK細胞培養(yǎng)至第14天時，IL-21組、IL-21+IL-2組上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-21量較對照組明顯升高，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），IL-21組、IL-21+IL-2

5、組IL-10量較對照組明顯降低，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），IL-21組、IL-21+IL-2組較對照組IL-2、TGF-β量無明顯變化，無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）；IL-21組、IL-21+IL-2組細胞亞群CD25+、CD3+CD4+、CD3+CD56+比例較對照組增加，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），IL-21組、IL-21+IL-2組CD3+CD8+、CD4+CD25+比例較對照組無明顯變化，無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）；IL

6、-21組、IL-21+IL-2組CIK細胞對K562細胞的毒性明較對照組明顯增強，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；IL-21 組、IL-21+IL-2組CIK細胞穿孔素、顆粒酶B、Fasl、IL-2R、IL-21R mRNA量表達較對照組明顯升高，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），IL-21組、IL-21+IL-2組顆粒酶A、NKG2DmRNA量表達較對照組無明顯變化，無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）；Western blot的結果顯示

7、，IL-21組、IL-21+IL-2組的STAT3和STAT5b表達較對照組明顯升高，IL-21組、IL-21+IL-2組、對照組STAT1和STAT5a的表達無明顯差異，此結果說明IL-21可以活化CIK細胞的STAT3和STAT5b信號通路。
　　結論：IL-21誘導CIK細胞，無促進增殖的作用，但可增加CD25+、CD3+CD4+、CD3+CD56+亞群比例，促進分泌IFN-γ、TNF-α、IL-21，抑制分泌IL-10，促