人源白細(xì)胞介素21增強(qiáng)CIK細(xì)胞抗白血病作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:研究白細(xì)胞介素21(IL-21)對外周血來源CIK細(xì)胞抗白血病的作用及其作用機(jī)制。
　　 方法:采集分離正常人的外周血單個(gè)核細(xì)胞，加用細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)CIK細(xì)胞，在IL-21作用下，MTT法檢測CIK細(xì)胞的增殖能力及殺傷白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞作用;流式直接免疫標(biāo)記法檢測CIK細(xì)胞表面IL-21受體(IL-21R)的表達(dá);半定量RT-PCR法檢測CIK細(xì)胞IFN-γ、TNF-α、TNF-β、穿孔素、顆粒酶A、顆粒酶B、Fa

2、sL和NKG2D mRNA的表達(dá);流式直接免疫標(biāo)記法檢測CIK細(xì)胞表面、perforin，F(xiàn)asL、NKG2D及細(xì)胞內(nèi)TNF-β的表達(dá);酶聯(lián)免疫法檢測培養(yǎng)上清中IFN-γ、TNF-α的表達(dá);免疫沉淀和Western-blot的方法檢測JAK-STAT細(xì)胞信號途徑的變化。
　　 結(jié)果:在IL-21作用下，培養(yǎng)14天時(shí)，(1)細(xì)胞數(shù)量的擴(kuò)增無明顯變化。(2)CIK細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷作用與未加細(xì)胞因子組相比明顯提高，但隨著時(shí)間的

3、延長殺傷作用逐漸減弱。(3) CIK細(xì)胞表面IL-21R的表達(dá)明顯增加約2倍。(4) CIK細(xì)胞IFN-γ mRNA的表達(dá)由(0.5103±0.2358)升至(0.7705±0.2493)穿孔素mRNA的表達(dá)量由(0.7592±0.1457)升至(0.9831±0.1265)，顆粒酶BmRNA的表達(dá)量由(0.4768±0.1589)升至(0.7319±0.1639)，F(xiàn)asL mRNA的表達(dá)量由(0.4608±0.2842)升至(0.7

4、381±0.2568)，TNF-β mRNA的表達(dá)量為(0.5993±0.1865)，與對照mRNA的表達(dá)(0.5688±0.1849)差別不大，NKG2DmRNA的表達(dá)為(0.6321±0.1586)，與對照mRNA的表達(dá)(0.6042±0.1268)差別不大。(5)培養(yǎng)上清中IFN-γ和TNFα的表達(dá)(6) CIK細(xì)胞表面FasL的表達(dá)為(0.19％)，與未加IL-21組(0.09％)相比明顯增加，perforin，NKG2D的表達(dá)