人白細(xì)胞介素21的原核表達(dá)、純化和初步應(yīng)用.pdf

1、細(xì)胞因子的研究是當(dāng)今免疫學(xué)的重要領(lǐng)域,其在科研、生產(chǎn)、臨床研究等方面都有重要作用。其中白細(xì)胞介素是在細(xì)胞間的相互作用、免疫調(diào)節(jié)以及炎癥過程中起重要作用的一類細(xì)胞因子。
　　 IL-21是2000年發(fā)現(xiàn)的,是IL-2家族的新成員。近年來研究發(fā)現(xiàn),IL-21主要由活化的CD4+細(xì)胞分泌,尤其是Th17細(xì)胞和Tfh細(xì)胞。成熟的人IL-21有4個(gè)螺旋結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)域與其它IL-2家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)有較高的同源性。IL-21具有廣泛的生物學(xué)功

2、能,能有效調(diào)節(jié)NK細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞的增殖、發(fā)育和功能活化。IL-21在臨床研究中具有廣泛研究,主要為在研究中疾病發(fā)生機(jī)理、病程和治療的關(guān)系。然而,由于細(xì)胞因子表達(dá)、純化的限制性,IL-21在體外大量應(yīng)用及基礎(chǔ)研究仍然受到限制。
　　 本研究構(gòu)建了rhIL-21的原核表達(dá)、純化流程,獲得純度合格的目的蛋白,操作簡便、蛋白回收率高。且有效地去除了內(nèi)毒素,使其能應(yīng)用于T淋巴細(xì)胞方面實(shí)驗(yàn),具有良好的生物學(xué)活性。采用自主構(gòu)建的B細(xì)胞體

3、外培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行活性評(píng)價(jià),本研究獲得的rhIL-21能有效促進(jìn)IgG抗體的分泌。與購買價(jià)格昂貴的商品化IL-21相比,本研究獲得的rhIL-21活化的具分泌高濃度抗體能力的B細(xì)胞比例更高(95％,99.4％)。
　　 研究發(fā)現(xiàn),IL-21能增強(qiáng)活化的抗原特異性T淋巴細(xì)胞的活性,在IGRA中的應(yīng)用可以有效增強(qiáng)其對(duì)結(jié)核的檢測。TB-IGRA試劑利用結(jié)核桿菌特異性T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核分枝感染感染。在IGRA的培養(yǎng)試劑中添加rhIL-21,