番鴨白細胞介素-2基因的克隆與原核表達.pdf

1、白細胞介素-2(IL-2)主要是由T淋巴細胞或T淋巴細胞系分泌產生的一類最有力的T細胞生長因子，屬于Th1型細胞因子。IL-2是一種糖蛋白，具有廣泛生物活性，能夠有效地提高免疫功能，具有誘導T細胞增殖和分化，誘導白細胞介素-2受體(IL-2R)的表達；促進B細胞分化、增殖及分泌抗體，同時活化B細胞表達高親和力IL-2R；可誘導和增強NK細胞、單核細胞等的殺傷活性，也可促進其他細胞因子的分泌以及刺激T細胞在體外的生長；增強淋巴細胞和內皮細

2、胞表面黏附因子的表達，促進淋巴細胞及其它活化細胞的粘附及移動能力；增加抗原遞呈細胞表面MHCⅠ和Ⅱ類分子的數量，增強抗原遞呈作用。在免疫應答系統(tǒng)中起著極其重要的調節(jié)作用，是一種天然的免疫增強佐劑。
　　 參照gene bank已發(fā)表的綠頭鴨IL-2基因序列，自行設計并合成一對特異性引物，以經有絲分裂原ConA活化的30日齡雛番鴨脾淋巴細胞總RNA為模板，應用RT-PCR方法擴增出片段大小為423bp的目的片段，將擴增片段通過T-

3、A策略連接到克隆質粒pMD18-T載體上，經PCR鑒定、酶切鑒定以及DNA序列測定，證明克隆片段為番鴨IL-2基因。該基因涵蓋番鴨IL-2基因的全部開放閱讀框(ORF)，編碼140個氨基酸組成的蛋白質。與gene bank中報道的番鴨IL-2基因序列有100％的同源性，與綠頭鴨IL-2基因序列進行比較，在ORF內有7個堿基不同，但其推導編碼的氨基酸二級結構完全相同。通過二級結構預測表明，它們含有類似于哺乳動物的α螺旋。IL-2基因序列分

4、析表明，番鴨IL-2基因與其它品種禽類IL-2基因有較高的同源性，從而進一步證明了番鴨IL-2基因具有較強的保守性。
　　 應用DNA重組技術，將番鴨IL-2基因亞克隆到GST融合基因表達載體pGEX6P-1的相應位點中，將鑒定正確的重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞。通過IPTG誘導，在大腸桿菌中表達了重組番鴨IL-2蛋白。SDS-PAGE電泳結果顯示，在相對分子量40KD(融合蛋白)處有明顯的蛋白質表達條帶，3