牛羊白細胞介素-18基因的克隆和表達.pdf

1、 牛羊白細胞介素18及其受體在家畜養(yǎng)殖業(yè)中是一種具有廣闊應用前景的新型免疫佐劑和免疫治療劑，在比較免疫學研究上也具有一定意義。 本研究根據已發(fā)表的IL-18成熟蛋白cDNA序列保守區(qū)設計一對特異性引物，應用RTPCR技術從山羊肺泡巨噬細胞和LPS/ConA活化的脾細胞中擴增到編碼山羊IL-18成熟蛋白基因，其大小為480bp。將該基因克隆到pMD18-T載體中，經序列測定表明山羊IL-18與奶牛和綿羊的IL-1

2、8基因序列高度同源，而且Caspase-1酶切位點的氨基酸序列沒有發(fā)生變異，決定IL-18活性的兩個關鍵氨基酸位點也沒有發(fā)生變異；文章以羊痘病毒作為模板，設計一對特異性引物，經PCR擴增了gIL-18BP基因，將該基因克隆到表達載體pET32a(+)中，經IPTG誘導，在大腸桿菌BL21(DE3)中實現了融合表達。目的蛋白以包涵體形式存在。表達產物經過變性、復性和層析純化后，具有體外抑制羊IL-18刺激MDBK細胞產生IFN-γ的活性。