人白細(xì)胞介素22自分泌環(huán)路在肺癌發(fā)生中的作用及抗凋亡機(jī)制研究.pdf

1、IL-22是一種IL-10相關(guān)的細(xì)胞因子，其功能性受體包括兩條鏈：IL-22R1和IL-10R2。IL-10R2鏈普遍表達(dá)于許多器官和組織中，其中包括免疫細(xì)胞、肺臟、肝臟和結(jié)腸等。IL-22通過和其受體結(jié)合可以導(dǎo)致快速的STAT磷酸化或AKT的活化，從而促進(jìn)肝細(xì)胞的存活和增殖。在支氣管肺泡灌洗液中分離出的肺泡巨噬細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞都可以檢測到IL-22的表達(dá)。肺結(jié)節(jié)病人和急性呼吸窘迫癥患者的IL-22表達(dá)要低于正常對照組。盡管這些現(xiàn)象提

2、示著IL-22在肺部炎性反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，但I(xiàn)L-22在肺部腫瘤中的作用尚未明確。 肺癌是第三大常見的惡性腫瘤，有75％診斷為肺癌的患者屬于非小細(xì)胞肺癌，其預(yù)后一般很差。雖然手術(shù)切除、放射治療以及化學(xué)藥物治療仍然是這一惡性腫瘤的基本治療方案，但非小細(xì)胞肺癌對化療藥物的敏感性是很低的，故抗腫瘤藥物的治療效果差。最主要的原因是非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)本身存在化療藥物抵抗性，其主要機(jī)制是干擾細(xì)胞正常的凋亡途徑，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活。

3、 本研究的目的在于探討IL-22與NSCLC的關(guān)系；闡述NSCLC在疾病進(jìn)展和藥物抵抗中的抗凋亡效應(yīng)以及IL-22在抗凋亡效應(yīng)中所發(fā)揮的作用。首先我們對手術(shù)切除的NSCLC標(biāo)本以及正常肺組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化分析；對Ⅰ～Ⅲ期NSCLC患者的外周血、Ⅳ期NSCLC患者的胸腔積液進(jìn)行ELISA檢測。我們發(fā)現(xiàn)IL-22在NSCLC患者的原發(fā)癌組織、血清以及惡性胸腔積液中的表達(dá)均顯著高于對照。IL-22受體的mRNA在肺癌組織以及NSCLC

4、細(xì)胞系中都有表達(dá)。接下來，我們構(gòu)建pcDNA3/IL-22表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染兩種NSCLC細(xì)胞株，建立穩(wěn)定表達(dá)IL-22的NSCLC細(xì)胞系。通過．Annexin V/PI雙染實驗、Caspase活性檢測和DNA片段分析來觀察IL-22轉(zhuǎn)染細(xì)胞和對照細(xì)胞在無血清饑餓培養(yǎng)或化療藥物誘導(dǎo)下細(xì)胞凋亡的情況。數(shù)據(jù)顯示，IL-22的表達(dá)可以活化STAT3信號傳導(dǎo)通路，誘導(dǎo)其下游的抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表達(dá)，保護(hù)NSCLC細(xì)胞抵抗無血清饑餓

5、誘導(dǎo)的凋亡和化療藥物誘導(dǎo)的凋亡。用IL-22R1的阻斷抗體阻止IL-22的信號傳遞可以使這一保護(hù)作用消失，促使腫瘤細(xì)胞凋亡。最后，我們選擇針對IL-22mRNA的靶序列構(gòu)建pU6+27/IL-22shRNA表達(dá)載體，希望通過RNA干擾來沉默IL-22基因的表達(dá)，進(jìn)一步證實IL-22在細(xì)胞凋亡中的作用。實驗結(jié)果表明，IL-22基因沉默可以導(dǎo)致細(xì)胞對化療藥物敏感，細(xì)胞凋亡增加。注射IL-22干擾質(zhì)?？梢砸种迫薔SCLC細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長。

6、綜上所述，IL-22在NSCLC患者的原發(fā)腫瘤組織、血清和胸腔積液中異常表達(dá)，且IL-22的受體mRNA也在NSCLC細(xì)胞系和腫瘤組織中表達(dá)，由此判斷IL-22在NSCLC中可以形成自分泌環(huán)路發(fā)揮作用。IL-22的基因轉(zhuǎn)染可以抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，IL-22基因沉默或阻斷IL-22R1可以逆轉(zhuǎn)IL-22的抑制作用。體內(nèi)實驗也證實，干擾腫瘤細(xì)胞內(nèi)IL-22的表達(dá)可以抑制腫瘤在裸鼠體內(nèi)的生長。我們的研究表明，在NSCLC中可能通過IL-22自