IL-21聯(lián)合IL-6作用于臍血Treg和CIK細(xì)胞增強(qiáng)抗白血病效應(yīng)的研究.pdf

1、目的：
　　探討白細(xì)胞介素21(IL-21)聯(lián)合白細(xì)胞介素6(IL-6)作用于臍血來源的CIK細(xì)胞（細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞）及Treg細(xì)胞（調(diào)節(jié)性T細(xì)胞）增強(qiáng)抗白血病效應(yīng)的影響。
　　方法：
　　1.體外分離正常足月產(chǎn)孕婦UBMCs，加用相應(yīng)細(xì)胞因子建立CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)的方法陽性分選CD3+CD56+CIK效應(yīng)細(xì)胞。
　　3.CCK-8法檢測(cè)外源IL-21及IL-6作用下CD3+CD

2、56+ CIK效應(yīng)細(xì)胞殺傷白血病細(xì)胞系K562及HL-60細(xì)胞的殺傷活性。
　　4.CCK-8法檢測(cè)外源IL-21與IL-6聯(lián)合及分別作用下CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系細(xì)胞的增殖能力。
　　5.LDH釋放法檢測(cè)外源IL-21及IL-6刺激下CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系細(xì)胞殺傷白血病細(xì)胞系K562及HL-60細(xì)胞的作用。
　　6.流式細(xì)胞術(shù)的方法檢測(cè)IL-21及IL-6作用下CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系細(xì)胞免疫表型的變化。
　　結(jié)果：
　

3、　1.IL-21聯(lián)合IL-6增強(qiáng)CD3+CD56+ CIK細(xì)胞殺傷白血病細(xì)胞的效應(yīng):在效靶比為20∶1時(shí)，IL-21+IL-6組CD3+CD56+ CIK細(xì)胞對(duì)K562及HL-60細(xì)胞的殺傷率達(dá)最高值[(59.63±2.13)％、(45.72±3.85)％]，均高于其它各組，而IL-21組[(48.37±3.06)％、(35.49±2.72)％]和IL-6組[(47.09±1.25)％、(33.99±1.83)％]兩組間細(xì)胞殺傷效應(yīng)未見

4、明顯差異，但是均高于對(duì)照組[(40.68±1.91)％、(23.77±3.01)％]。
　　2.IL-21聯(lián)合IL-6增強(qiáng)CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系細(xì)胞的增殖能力:以CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力發(fā)現(xiàn)，IL-21與IL-6聯(lián)合或單獨(dú)作用均可增強(qiáng)此細(xì)胞體系的增殖能力（以各組吸光度值反映增殖），然而，IL-21組與IL-6組間無明顯差異，但是，IL-21+IL-6組增殖能力明顯高于其他各組(P＜0.01)。
　　3.IL-21聯(lián)合IL

5、-6增強(qiáng)CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系細(xì)胞殺傷白血病細(xì)胞系K562及HL-60細(xì)胞的能力:在效靶比為20∶1時(shí)，對(duì)照組細(xì)胞對(duì)K562及HL-60細(xì)胞的殺傷率[(29.31±0.58)％、(20.14±1.27)％]均明顯低于各實(shí)驗(yàn)組(P＜0.01)，而IL-21+IL-6組殺傷率[(63.79±0.91)％、(41.53±1.43)％]均高于IL-21組[(52.99±1.26)％、(33.04±1.68)％]和IL-6組[(53.05±1.52)

6、％、(32.18±3.83)％]（P＜0.01），IL-21與IL-6組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.IL-21聯(lián)合IL-6增加CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系中CD3+CD56+細(xì)胞比例，同時(shí)降低體系中CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞比例:在細(xì)胞培養(yǎng)第7天，與對(duì)照組相比，IL-21組CD3+CD56+CIK細(xì)胞比例由(7.30±1.20)％上升至(12.52±1.45)％，IL-6組升至(11.01±1.04)％，IL-21+IL-6組升至(

7、20.8±2.33)％，而IL-21組CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞表達(dá)由(26.18±1.03)％降至(10.95±1.49)％，IL-6組降至(17.91±1.95)％，IL-21+IL-6組降至(5.25±0.54)％;在第14天，IL-21與IL-6組的CD3+CD56+CIK細(xì)胞比例為對(duì)照組的2倍，IL-21+IL-6組為對(duì)照組的2.5倍，而Treg細(xì)胞比例在IL-21組由(9.24±0.42)％降至（1.48±0.06）％

8、，IL-6組降至(3.96±0.11)％;IL-21+IL-6組Treg細(xì)胞降至（0.83±0.08）％。
　　結(jié)論：
　　1.IL-21聯(lián)合IL-6可直接作用于CD3+CD56+效應(yīng)細(xì)胞增強(qiáng)其對(duì)白血病細(xì)胞系K562及HL-60細(xì)胞的殺傷作用。
　　2.IL-21聯(lián)合IL-6可顯著促進(jìn)CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系細(xì)胞的增殖及抗白血病能力，同時(shí)可明顯增加CD3+CD56+效應(yīng)細(xì)胞比例，同時(shí)可顯著降低該培養(yǎng)體系中Treg細(xì)胞比例。因