IL-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2對人外周血單個核細(xì)胞增殖及抗白血病活性的研究.pdf

1、目的：白血病是血液系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，目前發(fā)病率呈逐年增高的趨勢。盡管目前臨床上可以通過化療、骨髓移植等手段使部分患者達(dá)到完全緩解，但多數(shù)患者終因耐藥、復(fù)發(fā)等情況導(dǎo)致治療失敗。因此，需要尋找更好的治療方法，以提高療效，改善患者的預(yù)后和生活質(zhì)量。越來越多的研究證據(jù)表明，免疫因素在控制造血系統(tǒng)惡性腫瘤中起重要作用，免疫治療也逐漸成為惡性血液病治療中的熱點(diǎn)。
　　 IL-23(interleukin-23，IL-23)是2000年發(fā)現(xiàn)

2、的一種細(xì)胞因子，屬于IL-12家族，主要由活化的樹突狀細(xì)胞(dendriticcell，DC)和巨噬細(xì)胞(Macrophage，Mφ)產(chǎn)生，能促進(jìn)記憶T細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞(naturalkillercell，NKcell)產(chǎn)生干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)，在機(jī)體的免疫防御、腫瘤免疫及某些自身免疫性疾病中起著重要作用。IL-2是由T細(xì)胞產(chǎn)生的一種自分泌生長因子，能刺激細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytoto

3、xicTlymphocyte，CTL)的增殖與分化，增強(qiáng)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性?，F(xiàn)已證實，IL-2在體內(nèi)具有顯著的抗腫瘤作用，但該作用依賴于外源性大劑量IL-2的持續(xù)輸注且常伴有嚴(yán)重的毒副作用。為減輕毒副作用，近年來相繼有不少關(guān)于小劑量IL-2與其他細(xì)胞因子聯(lián)合對T細(xì)胞體外增殖及功能影響的報道，且多呈協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)。
　　 IL-23能促進(jìn)T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，而且因其誘導(dǎo)產(chǎn)生的IFN-γ較少而不會在臨床應(yīng)用時產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副反應(yīng)，因

4、此有可能成為腫瘤治療中一種更為安全的選擇。目前國內(nèi)外尚無有關(guān)IL-23與IL-2聯(lián)合對白血病細(xì)胞影響的報道，本課題擬通過上述兩種細(xì)胞因子在不同濃度單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對人外周血單個核細(xì)胞增殖及抗白血病活性影響的研究，希望為白血病的免疫治療提供新的線索，以進(jìn)一步提高臨床惡性血液病的治療效果。
　　 方法：用Ficoll密度梯度離心法分離人外周血單個核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMC)，以含不

5、同濃度IL-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2的培養(yǎng)液培養(yǎng)后，用MTT比色法測定PBMC的增殖情況及PBMC對白血病K562細(xì)胞株的殺傷活性，采用流式細(xì)胞術(shù)分析誘導(dǎo)前后PBMC的細(xì)胞表型變化。所得結(jié)果運(yùn)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包處理，以α=0.05為顯著性檢驗水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.IL-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2對PBMC增殖的影響：IL-23各濃度組2、10、50ng/mL，及IL-23(ng/mL)+IL-2(IU/mL

6、)組2+10、10+10、50+10、2+100、10+100、50+100，作用于PBMC1d后測吸光度A值分別為0.536+0.047、0.628±0.018、0.660±0.036、0.643±0.030、0.710±0.031、0.768±0.022、0.732±0.020、0.798±0.047、0.864±0.053；3d后測A值分別為0.580±0.014、0.654±0.037、0.706±0.014、0.690±0.0

7、14、0.741±0.014、0.808±0.021、0.791±0.008、0.831±0.023、0.886±0.030；5d后A值分別為0.642±0.009、0.727±0.025、0.796±0.008、0.788±0.013、0.841±0.009、0.893±0.023、0.897±0.023、0.958±0.012、1.077±0.151。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，細(xì)胞因子各濃度組分別培養(yǎng)PBMC1d、3d、5d后均能增強(qiáng)PBMC

8、的增殖作用，各個時間點(diǎn)相比較，差異有顯著性(P＜0.05)；各濃度組間比較，單獨(dú)應(yīng)用IL-23各濃度組2、10、50ng/mL之間增殖作用有顯著性差異(P＜0.05)；相同濃度的IL-23（分別為2、10、50ng/mL）單獨(dú)應(yīng)用與分別聯(lián)合不同濃度IL-2（分別為10IU/mL、100IU/mL）組之間相比增殖作用有顯著性差異(P＜0.05)，即IL-23濃度相同時，在一定范圍內(nèi)，隨IL-2濃度的增加增殖作用也顯著性增加。同樣，當(dāng)IL-

9、2濃度相同時，聯(lián)合不同濃度IL-23，隨IL-23濃度的增加，各組間增殖作用也有顯著性差異(P＜0.05)，即IL-23對PBMC的增殖有促進(jìn)作用，與IL-2聯(lián)合可以增強(qiáng)這種促進(jìn)作用，在一定濃度范圍內(nèi)，隨著作用濃度增加和作用時間延長，IL-23聯(lián)合IL-2對PBMC有明顯的促進(jìn)增殖作用。
　　 2.IL-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2作用后的PBMC對白血病K562細(xì)胞株殺傷活性的影響：取各濃度組IL-23(2、10、50ng/mL)及

10、IL-23(ng/mL)+IL-2(IU/mL)組(2+10、10+10、50+10、2+100、10+100、50+100)處理1d后的PBMC，作用于K562細(xì)胞，檢測其殺傷率分別為：（8.6±0.42）％、(11.8±0.59)％、(15.2±0.57)％、(10.9±1.50)％、(13.0±0.91)％、(17.9±0.65)％、(16.4±1.07)％、(20.2±1.19)％、(23.5±0.77)％；細(xì)胞因子處理3d后的

11、PBMC對K562細(xì)胞的殺傷率分別為：(18.7±1.40)％、(23.1±0.25)％、(25.4±0.56)％、(21.4±1.06)％、(24.3±0.47)％、(30.7±0.51)％、(26.4±0.59)％、(32.0±0.98)％、(39.9±1.59)％；細(xì)胞因子處理5d后的PBMC對K562細(xì)胞的殺傷率分別為：(26.2±0.37)％、(30.1±0.68)％、(32.9±0.54)％、(29.9±0.73)％、(34

12、.5±0.64)％、(38.4±1.83)％、(35.9±1.13)％、(43.4±3.92)％、(52.2±3.38)％；統(tǒng)計學(xué)分析顯示，細(xì)胞因子各濃度組作用后的PBMC分別作用K562細(xì)胞1d、3d、5d后殺傷率明顯增加，各個時間點(diǎn)間比較，差異有顯著性(P＜0.05)；各濃度組間比較，單獨(dú)應(yīng)用IL-23各濃度組2、10、50ng/mL作用后的PBMC殺傷活性有顯著性差異(P＜0.05)；相同濃度的IL-23單獨(dú)作用與聯(lián)合不同濃度IL

13、-2作用后的PBMC相比較，隨IL-2濃度的增加，殺傷活性有顯著性差異(P＜0.05)；相同濃度的IL-2聯(lián)合不同濃度的IL-23作用于PBMC，隨IL-23濃度的增加，PBMC的殺傷活性也有顯著性差異(P＜0.05)。IL-23能促進(jìn)PBMC對K562細(xì)胞的殺傷活性，IL-23與IL-2聯(lián)合具有協(xié)同作用，可以增強(qiáng)殺傷活性。在一定濃度和時間范圍內(nèi)，增加IL-2作用濃度和作用時間，可以進(jìn)一步增強(qiáng)PBMC的殺傷活性。
　　 3.IL

14、-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2誘導(dǎo)前后PBMC的細(xì)胞表型的變化：IL-2350ng/mL與IL-23+IL-2(50ng/mL+100IU/mL)組作用于PBMC5d后，流式細(xì)胞術(shù)檢測其細(xì)胞表型分別為，CD3+細(xì)胞為(80.7±4.37)％和(83.2±4.04)％，CD16+CD56+細(xì)胞為(8.4±0.28)％和(12.7±0.9)％，CD4+細(xì)胞為(45.2±1.4)％和(47.0±1.72)％，CD8+細(xì)胞為(34.5±2.53)％和

15、(35.4±2.11)％；CD4+/CD8+比值分別為1.31和1.33，對照組為1.27。經(jīng)單因素方差分析，以上兩組與對照組相比對PBMC細(xì)胞表型的增加有顯著性差異(P＜0.05)；兩組間在CD16+CD56+細(xì)胞的表達(dá)上有顯著性差異(P＜o(jì).05)；兩組間對CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞的表達(dá)以及CD4+/CD8+比值的變化均無顯著性差異(P＞0.05)。IL-23+IL-2(50+100)組可以更強(qiáng)的促進(jìn)CD16+CD5

16、6+細(xì)胞的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1.IL-23能促進(jìn)PBMC的增殖，聯(lián)合IL-2后可以進(jìn)一步促進(jìn)PBMC的增殖，二者對PBMC的增殖有協(xié)同作用，并呈時間和濃度依賴性。
　　 2.IL-23能促進(jìn)PBMC對K562細(xì)胞的殺傷活性，IL-23與IL-2聯(lián)合可以增強(qiáng)PBMC的殺傷活性，并呈時間和濃度依賴性。
　　 3.IL-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2誘導(dǎo)后PBMC中CD3、CD16/56、CD4、CD8抗原的