重組沙門氏菌疫苗增強(qiáng)NK細(xì)胞抗白血病效應(yīng)及白血病裸鼠模型的建立.pdf

1、研究背景與目的:
　　 通過激活自身免疫系統(tǒng)的腫瘤免疫治療越來越受到關(guān)注，它能抑制很多種人類惡性腫瘤細(xì)胞而又不影響正常細(xì)胞。固有免疫產(chǎn)生于系統(tǒng)發(fā)育的早期和宿主免疫應(yīng)答的初級階段，調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫應(yīng)答是固有免疫最重要的功能，目前認(rèn)為它不具有免疫記憶功能。有研究顯示鼠自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的一個特殊亞群對各種各樣的抗原能形成長久且特異性強(qiáng)的記憶功能。NK細(xì)胞是不同于T、B淋巴細(xì)胞的大顆粒細(xì)胞，分布于外周各淋巴器官及血液循環(huán)系統(tǒng)，無需

2、抗原的預(yù)先刺激與活化即可發(fā)揮細(xì)胞毒效應(yīng)，并可分泌多種細(xì)胞因子。NK細(xì)胞表達(dá)一系列活化性受體和抑制性受體，兩者間的平衡是控制NK細(xì)胞是否被激活的重要機(jī)制。正常情況下，靶細(xì)胞表面自身MHCⅠ類分子與NK細(xì)胞表面抑制性受體結(jié)合傳導(dǎo)抑制性信號，從而抑制NK細(xì)胞功能，靶細(xì)胞不會受到NK細(xì)胞的攻擊。病理狀態(tài)下，這種平衡被打破，NK細(xì)胞即可能對靶細(xì)胞行使“killing”效應(yīng)。
　　 研究表明，經(jīng)過外源性DNA預(yù)處理的腫瘤來源細(xì)胞能促進(jìn)固有或

3、適應(yīng)性免疫應(yīng)答，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。如插入免疫激活基因能刺激NK細(xì)胞的抗腫瘤免疫應(yīng)答，提示外源DNA能作為免疫治療及細(xì)胞毒作用的刺激因子。次要組織相容性抗原基因HA-1特異地表達(dá)在造血細(xì)胞中，能識別HA-1的殺傷性T細(xì)胞，有明顯的抗白血病效應(yīng);AML/ETO是急性髓系白血病-M2型特異性融合基因。HA-1和AML/ETO在白血病的形成中起重要作用?；罹d體疫苗是將異源抗原基因插入活細(xì)菌的染色體或質(zhì)粒載體中，激發(fā)免疫系統(tǒng)提呈異源抗原并產(chǎn)

4、生免疫保護(hù)，從而達(dá)到預(yù)防一種或多種疾病的新型疫苗?；罹d體疫苗不但能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，而且能產(chǎn)生細(xì)胞免疫和黏膜免疫應(yīng)答。一直以來，以沙門氏菌(Salmonella)為載體的菌株是此類疫苗載體研究的一個熱點。傷寒沙門氏菌(SalmonellaentericaserovarTyphi)是一種對人專性致病的野生毒株，具有很強(qiáng)的免疫原性和反應(yīng)原性。它是一種常見的侵襲性胞內(nèi)菌，通過基因工程方法減毒后對宿主致病性顯著降低，但仍保留良好的侵襲力，

5、可將免疫抗原直接遞呈給免疫細(xì)胞而誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答反應(yīng)，減毒鼠傷寒沙門氏菌作為口服疫苗載體是目前疫苗免疫研究的熱點之一。
　　 基于以上研究結(jié)果和理論，本研究構(gòu)建AML/ETO及HA-1的重組質(zhì)粒，將免疫原型基因AML/ETO及HA-1的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到減毒沙門氏菌，構(gòu)建重組沙門氏菌疫苗，以此疫苗侵染AML/ETO陽性的急性白血病Kasumi-1細(xì)胞，體外實驗觀察NK細(xì)胞對疫苗侵染的Kasumi-1細(xì)胞具有殺傷作用。此外，通過不