IL-21基因修飾的臍血干細(xì)胞抗裸鼠卵巢癌作用研究.pdf

1、東南大學(xué)博士學(xué)位論文IL21基因修飾的臍血干細(xì)胞抗裸鼠卵巢癌作用研究姓名：胡衛(wèi)華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)；免疫學(xué)指導(dǎo)教師：竇駿20110920東南大學(xué)博士學(xué)位論文bloodmesenchymalstemcell，UMSC)具有強(qiáng)大的增殖能力，在體外長期培養(yǎng)過程中可以始終保持其多向分化潛能，在特定條件誘導(dǎo)下可以分化為各種組織細(xì)胞，如成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成肌膜、成肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等。研究報(bào)道MSC具有極好的遷移能力(ex

2、cellentmigratoryability)和腫瘤趨向性(tropism)。亦有研究顯示外源UMSC進(jìn)入體內(nèi)后，也會(huì)優(yōu)先聚集于腫瘤組織，而且UMSC體外能大量擴(kuò)增，被外源基因轉(zhuǎn)染并保持高效、長時(shí)間表達(dá)，還具有低免疫原性，能在宿主體內(nèi)長期存留。UMSC的這些特性為腫瘤基因治療和細(xì)胞移植免疫治療提供了新的策略。IL21是具有多種生物學(xué)功能的重要免疫調(diào)節(jié)因子，能介導(dǎo)固有性免疫向適應(yīng)性免疫轉(zhuǎn)換，參與體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。IL21可促進(jìn)B、

3、T細(xì)胞增殖，促進(jìn)臍血祖細(xì)胞轉(zhuǎn)化為NK細(xì)胞，并使其對(duì)靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性增加。越來越多的研究已經(jīng)證實(shí)lL2l細(xì)胞因子在抗腫瘤治療中具備強(qiáng)大潛能。因此，我們將IL21構(gòu)建于含有增強(qiáng)綠色熒光蛋白(EGFP)的質(zhì)粒上，將重組體plESR2IL21EGFP用于基因修飾的治療性實(shí)驗(yàn)中。細(xì)胞基因修飾在基因治療中一直為人們所關(guān)注，并逐步成為一種征服多種疾病的重要手段。本研究基于目前對(duì)臍血干細(xì)胞(umbilicalcordbloodstemcells，USC

4、)基因治療的最新認(rèn)識(shí)，對(duì)USC中的UHSC和UMSC進(jìn)行體外培養(yǎng)，對(duì)它們的生物學(xué)特性、分化趨勢(shì)和定向誘導(dǎo)分化及靶向性等進(jìn)行研究，并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行USC轉(zhuǎn)基因治療實(shí)體腫瘤，嘗試將基因治療與細(xì)胞移植免疫治療相結(jié)合抗卵巢癌實(shí)體瘤，觀察其療效，探討其可能的作用機(jī)制。目的：將重組體plESR2一IL21EGFP分別轉(zhuǎn)染CD34UHSC和UMSC，以荷上皮性卵巢癌裸鼠為動(dòng)物模型，分別移植CD34UHSCIL21和UMSCIL21對(duì)荷瘤裸鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性

5、治療和觀察，再通過體內(nèi)外的一系列實(shí)驗(yàn)，探討IL21基因修飾的CD34UHSC和UMSC治療卵巢癌的效應(yīng)及其作用機(jī)制。為實(shí)現(xiàn)USC基因治療卵巢癌的臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)和提供實(shí)驗(yàn)佐證。方法：1建立穩(wěn)定的CD34UHSC的體外分離、培養(yǎng)擴(kuò)增體系，研究其若干生物學(xué)特性，并尋找體外培養(yǎng)的CD34UHSC進(jìn)行基因修飾的最佳時(shí)期，以提高轉(zhuǎn)染效率，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。2探討IL2l轉(zhuǎn)染的CD34UHSC(CD34UHSCIL21)對(duì)荷卵巢癌裸鼠的治療作