DC對同源CIK細(xì)胞生物學(xué)活性及抗急性白血病細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的：探討急性白血病細(xì)胞免疫治療的新途徑。將樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DC)和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine induced killer cells，CIK)一起孵育，觀察共培養(yǎng)物DC細(xì)胞與CIK細(xì)胞的增殖能力、免疫膜標(biāo)變化、分泌細(xì)胞因子水平以及抗急性白血病細(xì)胞的效應(yīng)。同時與CIK細(xì)胞單獨培養(yǎng)的生物學(xué)活性和抗白血病作用相比較，為白血病治療尋找一種更理想的免疫活性細(xì)胞。
　　 方法：CIK細(xì)胞的體外培

2、養(yǎng)。采取正常健康人的外周血，經(jīng)肝素抗凝后，用H-F(Hypaque-Ficoll)淋巴細(xì)胞分離液相對密度為1.077±0.001，分離獲得單個核細(xì)胞(mononuclearn cells，MNC)。然后用RPMI 1640培養(yǎng)液洗滌3次，調(diào)整細(xì)胞濃度至4×106/ml，進(jìn)行貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，收集懸浮的細(xì)胞，用含10％小牛血清(fetal calf serum，F(xiàn)BS)RPMI 1640液將細(xì)胞濃度調(diào)整至1×106/ml，經(jīng)37℃、5％CO2

3、培養(yǎng)，分別于第0天、第1天加入不同的細(xì)胞因子，以后每隔3天更換新的培養(yǎng)液。3天后更換培養(yǎng)液的同時補(bǔ)充加入重組人白細(xì)胞介素-2(rh-interleukin-2，rhIL-2)。DC細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法是通過將健康人外周血單個核細(xì)胞，用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為4×106/ml，培養(yǎng)1到2小時，吸棄培養(yǎng)基及懸浮的細(xì)胞，在培養(yǎng)瓶中加入新鮮的RPMI 1640培養(yǎng)液，反復(fù)吹吸使貼壁細(xì)胞懸浮。收集懸浮貼壁細(xì)胞，離心洗滌，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，調(diào)

4、整細(xì)胞濃度為1×106/ml。然后用含有10％的FBS的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)液中同時加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rh-granulocytemacroph-age.colony-stimulating.factor,rhGM-CSF)550 U/ml、重組人白細(xì)胞介素-4(rh-interleukin-4，rhIL-4)500 U/ml。按照常規(guī)培養(yǎng)，隔日半量換液，并補(bǔ)加細(xì)胞因子。于培養(yǎng)72小時前再加入重組人腫瘤

5、壞死因子-a(rh-tumor necrosis factor-a,rhTNF-a)50 U/ml，誘導(dǎo)DC細(xì)胞的成熟。將獲培養(yǎng)第9天的DC細(xì)胞及CIK細(xì)胞經(jīng)臺盼藍(lán)排斥法活細(xì)胞計數(shù)后，用含有10％FBS的RPMI 1640液調(diào)整細(xì)胞濃度，調(diào)整DC細(xì)胞濃度為1×106/md，CIK細(xì)胞濃度為5×106/ml，按照DC細(xì)胞與CIK細(xì)胞之比為1:5的比例將兩者混合培養(yǎng)，培養(yǎng)至第3天與第6天收集共培養(yǎng)的細(xì)胞，進(jìn)行生物學(xué)活性測定。
　　

6、結(jié)果：研究結(jié)果表明，DC細(xì)胞與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后，其細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞毒活性、免疫表型的表達(dá)、細(xì)胞因子分泌水平與單獨CIK細(xì)胞相比有明顯或顯著性差異。
　　 結(jié)論：與DC細(xì)胞共培養(yǎng)可以提高CIK細(xì)胞的增殖速度；DC細(xì)胞可增強(qiáng)CIK細(xì)胞的殺傷活性，在同一效靶比對急性白血病細(xì)胞的殺傷活性各型之間無明顯差異，隨著效靶比的增高對急性白血病細(xì)胞的殺傷活性增強(qiáng)；共培養(yǎng)細(xì)胞CD3+CD8+及CD3+CD56+雙陽性細(xì)胞比值明顯高于同條件下單獨