RetroNectin誘導(dǎo)的DC-CIK細(xì)胞生物學(xué)特性及對K562細(xì)胞殺傷活性的研究.pdf

1、中圖分類號BZ三Q：三!UDC610碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼lQ三三三密級公玨RetroNectin誘導(dǎo)的DCCIK細(xì)胞生物學(xué)特性及對K562細(xì)胞殺傷活性的研究BiologicalCharacteristicsandAntitumorActivityofDC—CIKCellsInducedbyRetroNectinforK562cells作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：全玲麗臨床醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)湘雅三醫(yī)院唐雪元教授論文答辯

2、日期醴!至：衫答辯委員會主席中南大學(xué)2014年5月RetroNectin誘導(dǎo)的DC—CIK細(xì)胞生物學(xué)特性及對K562細(xì)胞殺傷活性的研究摘要目的：探討重組人纖維連接蛋白(RetroNectin，RN)誘導(dǎo)的DCCIK細(xì)胞生物學(xué)特性以及對K562細(xì)胞殺傷活性的影響，以建立一種高效、簡便、殺瘤活性強(qiáng)的DCCIK細(xì)胞培養(yǎng)方法。方法：通過分離健康人外周血單個核細(xì)胞，經(jīng)DCCIK條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得大量的DCCIK細(xì)胞，將其分為空白組、對照組和實

3、驗組，空白組不加入RN和DC—CIK條件培養(yǎng)基(PBMCs組)，對照組不加入RN(DCCIK組)，實驗組加入RN(RNDC—CIK組)，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞動態(tài)增殖情況及細(xì)胞形態(tài)變化，采用流式細(xì)胞儀檢測其免疫表型，AnnexinVFITC檢測細(xì)胞的凋亡情況。應(yīng)用CCK一8試劑盒分別檢測兩組細(xì)胞在不同效靶比時對K562細(xì)胞的殺傷活性，采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測K562／DCCIK組、K562／RNDCCIK組細(xì)胞IFN小IL—l8

4、分泌水平。采用實時定量多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(ImPCR)檢測細(xì)胞中miRNA21表達(dá)情況。結(jié)果：1RN—DCCIK組細(xì)胞生長增殖速度顯著快于DCCIK組2倍～35倍，從第7天到第14天，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P005)。DCCIK組細(xì)胞凋亡率為544土111％，RNDCCIK組細(xì)胞凋亡率為181土046％，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(PO05)。2隨著效靶比的增加，各組效應(yīng)細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷活性也增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義儼005)；同一

5、效靶比下，RN—DC—CIK組細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷率高于DC—CIK組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義fP005)。3K562／RNDCCIK組細(xì)胞IFN一1，分泌量顯著高于K562／DC—CIK組，K562／DC—CIK組細(xì)胞IL—18分泌量較K562／RNDCCIK組高，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義fP005)。4經(jīng)qRTPCR檢測分析可知，與對照組相比，K562／RN—DCCIK組細(xì)胞miRNA2l表達(dá)顯著低于K562／DC—CIK組，