DC-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞聯(lián)合索拉菲尼對(duì)肝癌細(xì)胞體內(nèi)外殺傷效應(yīng)的研究.pdf

1、目的：
　　 觀察DC、CIK共培養(yǎng)細(xì)胞（DC-CIK）聯(lián)合索拉菲尼對(duì)肝癌細(xì)胞的體內(nèi)外殺傷效應(yīng)。探討生物治療與分子靶向治療聯(lián)合的新模式，為肝癌的綜合治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 一、DC、CIK細(xì)胞的體外誘導(dǎo)擴(kuò)增及表型檢測(cè)。
　　 分離健康供體外周血單個(gè)核細(xì)胞，加入不同細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)擴(kuò)增培養(yǎng)DC、CIK細(xì)胞。于第8 d天收集DC、CIK細(xì)胞，以1:5的比例混合培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)7d后進(jìn)行靶細(xì)胞殺傷

2、實(shí)驗(yàn)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC表面成熟標(biāo)志CD83、CD80、CD86、HLA-DR的表達(dá)，CIK細(xì)胞檢測(cè)CD3、CD4、CD8、CD56的表達(dá)。
　　 二、DC-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞及索拉菲尼對(duì)肝癌細(xì)胞的體外殺傷活性及凋亡率檢測(cè)。
　　 應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)索拉菲尼單藥組，DC-CIK組及DC-CIK聯(lián)合索拉菲尼治療組（聯(lián)合組）對(duì)肝癌細(xì)胞系BEL-7402的殺瘤活性。Annexin v-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)以上各組對(duì)肝

3、癌細(xì)胞凋亡率的影響；凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定使用Hoechst 33258染料對(duì)固定后的細(xì)胞染色檢測(cè)。
　　 三、比較各組對(duì)裸鼠肝癌移植瘤生長的抑制作用。
　　 用肝癌細(xì)胞BEL-7402建立裸鼠皮下移植瘤模型，將20只裸鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、索拉菲尼單藥組、DC-CIK治療組、聯(lián)合組，每3天測(cè)量瘤體大小，比較各組對(duì)裸鼠肝癌移植瘤生長的抑制作用。
　　 結(jié)果：
　　 一、DC、CIK的體外培養(yǎng)及表面抗原檢測(cè)

4、
　　 外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)GM-CSF、IL-4誘導(dǎo)可獲得成熟DC，加入腫瘤裂解物抗原及誘導(dǎo)因子后，DC表面成熟標(biāo)志CD83、CD80、CD86、HLA-DR的表達(dá)明顯增加。CIK細(xì)胞中CD3+CD56+細(xì)胞為主要效應(yīng)細(xì)胞，經(jīng)多種細(xì)胞因子共同培養(yǎng)14天后CIK細(xì)胞成熟，CD3+CD56+細(xì)胞比例明顯增多，絕對(duì)數(shù)量上擴(kuò)增了近1000倍。
　　 二、DC-CIK聯(lián)合索拉菲尼誘導(dǎo)的特異性殺傷作用及調(diào)亡率
　　 體外實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)果表明，聯(lián)合組對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷率及誘導(dǎo)凋亡率明顯高于各單獨(dú)治療組，聯(lián)合組殺傷率最高達(dá)（75.24±1.91）％，是DC-CIK組的1.8倍，是索拉菲尼單藥組的2.1倍（P<0.01），聯(lián)合組誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡率達(dá)（78.78±2.54）％，與單獨(dú)治療組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 三、DC-CIK聯(lián)合索拉菲尼對(duì)裸鼠肝癌移植瘤的影響
　　 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合索拉菲尼可明顯抑制裸鼠肝癌細(xì)胞種植