體外誘導(dǎo)DC-CIK的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討白細(xì)胞介素-15(Interleukin15，IL-15)及骨髓來(lái)源樹(shù)突細(xì)胞(DendriticCell，DC)對(duì)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(Cytokone-Induced Killer，CIK)細(xì)胞增殖能力，免疫表型，以及殺傷肝癌細(xì)胞的作用。
　　方法：體外培養(yǎng)小鼠骨髓源性DC，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)(Flowcytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)鑒定DC細(xì)胞CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c表達(dá)情況。分為IL-15處理和未處理

2、條件下培養(yǎng)CIK、DC-CIK細(xì)胞，通過(guò)FCM鑒定CIK細(xì)胞中CD3+、CD3+CD8+、CD3+NK1.1+表達(dá)情況。培養(yǎng)分組：CIK，CIK+IL-15，C1K+DC，CIK+IL-15+DC觀察IL-15及DC對(duì)CIK細(xì)胞增殖能力的影響，通過(guò)FCM用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其免疫表型的變化。將CIK細(xì)胞及IL-15刺激后的CIK分別與DC以5:1效靶比進(jìn)行培養(yǎng)，用臺(tái)盼藍(lán)活細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)算細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)，F(xiàn)CM檢測(cè)其表型變化，同時(shí)通過(guò)測(cè)定乳酸脫氫酶

3、(LDH)檢驗(yàn)殺傷活性。數(shù)據(jù)通過(guò)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果：每只小鼠骨髓細(xì)胞可培養(yǎng)出(5.5±0.5)×106個(gè)DC，且FCM檢測(cè)顯示DC高表達(dá)CD80(95.0±1.2％)、CD86(88.5±1.4％)、MHC-Ⅱ(89.2±1.2％)及CD11c(83.3±1.7％)。每只小鼠脾臟可獲得約(4.5±0.5)×106個(gè)CIK細(xì)胞，在第14天時(shí)35.0±2.7％的細(xì)胞為CD3+、18.8±2.4％的細(xì)胞為CD3

4、+CD8+、17.1±2.5％的細(xì)胞為CD3+NK1.1+。骨髓源樹(shù)突細(xì)胞刺激及培養(yǎng)體系中加入IL-15后的CIK細(xì)胞增殖能力高于常規(guī)對(duì)照組，CD3+和CD3+CD8+、CD3+NK1.1+雙陽(yáng)性細(xì)胞比率均高于常規(guī)對(duì)照組(P<0.05)。培養(yǎng)后小鼠脾源CIK、細(xì)胞總數(shù)在第10、15天分別為(2.1±0.1)×107，(2.4±0.2)×107，與對(duì)照組(0.5×107)相比具有顯著性差異(P<0.05)。在2.5:1～20:1的效靶比范

5、圍內(nèi)，IL-15刺激的CIK及DC-CIK細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷率顯著高于CIK細(xì)胞(P<0.05)，且殺傷率與效靶比呈正相關(guān)。在效靶比20:1時(shí)，共IL-15刺激的DC-CIK細(xì)胞對(duì)Hepal-6肝癌細(xì)胞殺傷率為(58.75±4.34)％。
　　結(jié)論：培養(yǎng)基細(xì)胞因子選擇法培養(yǎng)可收獲大量的骨髓源DC，在多種細(xì)胞因子作用下可培養(yǎng)大量脾臟來(lái)源的CIK。IL-15和骨髓源性DC均可增加CIK細(xì)胞的增殖能力及膜表面抗原的表達(dá)率，且二者具有疊