耐門冬酰胺酶的急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞生物學(xué)特性研究.pdf

1、研究背景
　　 目前，盡管急性淋巴細(xì)胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia;ALL)的預(yù)后得到很大的改善。然而，由于化療耐藥因素的存在導(dǎo)致許多患者難以獲得緩解或最終復(fù)發(fā)。近來，隨著對腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cell;CSC)研究的深入，越來越多的研究認(rèn)為腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，其罪魁禍?zhǔn)资怯捎贑SC的存在，而人們在進(jìn)行“CSC”生物學(xué)特性研究中發(fā)現(xiàn)，多藥耐藥性是CSC的重要特性之一。而耐藥的AL

2、L細(xì)胞中是否同樣存在CSC?本研究中應(yīng)用治療ALL的常用化療藥物門冬酰胺酶(L-asparaginase;L-asp)誘導(dǎo)T-ALL細(xì)胞Jurkat對其耐藥，建立耐藥細(xì)胞系。應(yīng)用實時定量PCR法、流式細(xì)胞學(xué)法檢測耐藥ALL細(xì)胞系的CSC相關(guān)基因的表達(dá)情況、細(xì)胞表面抗體表達(dá)變化情況、側(cè)群細(xì)胞(sidepopulation;SP)含量，進(jìn)一步研究耐藥ALL細(xì)胞系的生物學(xué)特性，進(jìn)而了解ALL多藥耐藥的機制以及多藥耐藥和CSC之間的關(guān)系，從而為

3、自血病的靶向治療和耐藥逆轉(zhuǎn)等提供實驗依據(jù)。
　　 目的
　　 探討耐門冬酰胺酶的急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞的生物學(xué)特性。
　　 方法：
　　 1.本實驗以人T-ALL細(xì)胞株Jurkat為親本細(xì)胞，經(jīng)過L-asp逐步增量誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞耐藥，建立耐L-asp的急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株。觀察其形態(tài)學(xué)特征及生長特性，MTT比色法分析耐藥細(xì)胞系的耐藥圖譜和耐藥指數(shù)。
　　 2.分別收集Jurkat和耐

4、L-asp的Jurkat細(xì)胞，用流式細(xì)胞學(xué)方法檢測析。Jurkat細(xì)胞耐藥前后的細(xì)胞膜表面標(biāo)志的變化情況。
　　 3.Jurkat和耐藥Jurkat細(xì)胞Hoechst33342染色后，對比維拉帕米抑制試驗，應(yīng)用流式細(xì)胞學(xué)法檢測SP細(xì)胞含量。
　　 4.用實時定量PCR法分析Jurkat細(xì)胞和Jurkat/L-asp細(xì)胞中ABCG2、Sox-2、Oct-4、Nanog基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1

5、.成功建立了能夠在0.5u/ml的L-asp培養(yǎng)液中穩(wěn)定生長的耐藥細(xì)胞株，命名為Jurkat/L-asp。
　　 2.MTT比色法分析了其耐藥圖譜，結(jié)果顯示：Jurkat/L-asp對柔紅霉素、依托泊苷、甲氨蝶呤、阿糖胞苷耐藥指數(shù)是Jurkat的15.5、9.59、4.28、4.98倍。
　　 3.實時定量PCR擴增結(jié)果顯示人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞系Jurkat/L-asp較Jurkat細(xì)胞高表達(dá)ABCG2、Sox-2基

6、因，前者較后者有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。而Oct-4、Nanog基因在Jurkat/L-asp細(xì)胞和Jurkat細(xì)胞中的表達(dá)無明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 4.Jurkat/L-asp細(xì)胞較Jurkat細(xì)胞高表達(dá)CD34和CD13，前者較后者有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。對數(shù)生長期的耐藥T-ALL細(xì)胞系Jurkat/L-asp細(xì)胞用Hoechst33342染色，對比維拉帕米抑制試驗，在流式細(xì)胞儀上檢測兩