MBD2在急性白血病細(xì)胞中的表達(dá)及其沉默后對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：
　　擬在蛋白水平和mRNA水平研究甲基化DNA結(jié)合蛋白2（MBD2）在不同白血病細(xì)胞系中的表達(dá)情況；進(jìn)一步研究MBD2在初治急性白血病患者中的表達(dá)情況，并分析其與患者預(yù)后的相關(guān)性；研究MBD2基因沉默后，對(duì)Jurkat細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等生物學(xué)行為的影響。
　　方法：
　　1.從不同白血病細(xì)胞系中提取總蛋白，通過Western Blot檢測(cè)MBD2的蛋白水平表達(dá)情況；從上述細(xì)胞系中提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄得cDNA

2、后，通過RT-PCR檢測(cè)MBD2的mRNA水平表達(dá)情況。
　　2.從初治的急性白血病患者骨髓中提取單個(gè)核細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄得cDNA后，通過RT-PCR檢測(cè)MBD2在mRNA水平的表達(dá)情況。通過查閱患者實(shí)驗(yàn)室檢查資料，統(tǒng)計(jì)分析得出MBD2表達(dá)高低與其危險(xiǎn)度分層有無(wú)關(guān)聯(lián)，從而證實(shí)MBD2能否成為一項(xiàng)有意義的治療靶點(diǎn)。
　　3.選取Jurkat為目的細(xì)胞系，電轉(zhuǎn)染siRNA沉默MBD2的表達(dá)，通過Western Blot和RT

3、-PCR檢測(cè)其有沉默效應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)。
　　4.收集電轉(zhuǎn)染后72小時(shí)的Jurkat細(xì)胞，分別用Annexin V-PI雙染法，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；用PI染色檢測(cè)細(xì)胞周期改變。
　　結(jié)果：
　　1.通過對(duì)6種不同類型白血病細(xì)胞系的MBD2蛋白水平和mRNA水平的表達(dá)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其蛋白水平和RNA水平一致表達(dá)基本一致。
　　2.通過對(duì)41例標(biāo)本檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MBD2 mRNA水平在不同白血病類型中表達(dá)高低不一致。與對(duì)

4、照組相比，髓系白血病中MBD2 mRNA表達(dá)未見明顯升高，而淋巴細(xì)胞腫瘤中表達(dá)有所升高。通過亞組分析發(fā)現(xiàn)在高危B-ALL中表達(dá)明顯升高。
　　3.選取轉(zhuǎn)染si-RNA后48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，收集Jurkat細(xì)胞通過Western Blot和RT-PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其72小時(shí)（蛋白水平和RNA水平）沉默效應(yīng)最明顯。
　　4.收集轉(zhuǎn)染后72小時(shí)的Jurkat細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞凋亡率輕微上調(diào)；對(duì)細(xì)胞周期有阻滯作用，將J