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文檔簡介
1、目的:
1.明確IL-21與CHB患者外周血中Th17/Treg細(xì)胞失衡之間的關(guān)系。
2.初步探討IL-21在CHB患者外周血中Th17/Treg細(xì)胞失衡中的作用機(jī)制。
方法:
1.IL-21與CHB患者外周血中Th17/Treg細(xì)胞失衡之間的關(guān)系
1.1收集慢乙肝患者(CHB)和健康對照者(HC)新鮮外周肝素抗凝血,流式細(xì)胞術(shù)檢測PBMCs中CD4+CD25highCD127lowTr
2、eg細(xì)胞頻數(shù),細(xì)胞內(nèi)因子染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測Th17細(xì)胞頻數(shù)。
1.2收集慢乙肝患者(CHB)和健康對照者(HC)新鮮外周肝素抗凝血,留取血清,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測各組血清中IL-21、IL-17、IL-10、TGF-β的濃度。
1.3 CHB及ACLF患者外周血Th17、Treg細(xì)胞頻數(shù)與IL-21濃度、部分肝功能指標(biāo)、HBVDN
3、A等進(jìn)行相關(guān)性分析。
2.IL-21在CHB患者外周血中Th17/Treg細(xì)胞失衡中的作用機(jī)制
2.1通過密度梯度離心法獲取CHB患者外周血PBMCs,實(shí)驗(yàn)分為IL-21組、IL-2組、PBS組。調(diào)整IL-21終濃度為0.1μg/ml、IL-2終濃度為0.1μg/ml,IL-21共刺激48h。
2.2熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測各組PBMCs RORγt和Foxp3 mRNA表達(dá)水平。
2.3 ELI
4、SA法檢測各組上清中IL-17、IL-10、TGF-β的濃度。
結(jié)果:
1.CHB患者Th17細(xì)胞頻數(shù)顯著高于HC組(P=0.001),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CHB患者Th17與Treg比值顯著高于HC組(P=0.000),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.CHB患者外周血清IL-21濃度高于HC組(P=0.001),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3.CHB患者外周血清IL-21濃度與外周血Th17/Treg細(xì)胞呈
5、正相關(guān)(r=0.363,P=0.008),并且CHB患者外周血清IL-21濃度與外周血Th17細(xì)胞頻數(shù)也呈正相關(guān)(r=0.380,P=0.005),但I(xiàn)L-21濃度與外周血Treg細(xì)胞頻數(shù)無明顯相關(guān)(r=-0.012,P=0.935)。
4.CHB患者IL-17、TGF-β濃度均明顯高于HC組(P=0.002,P=0.030),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CHB患者IL-10濃度高于HC組,但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
5.CH
6、B患者外周血Th17細(xì)胞頻數(shù)與ALT呈正相關(guān)(r=0.289,P=0.038),且Th17/Treg細(xì)胞與血清TBIL呈正相關(guān)(r=0.579,P=0.000)。
6.RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)CHB患者外周血PBMCs加入IL-21刺激后RORγt的表達(dá)量顯著高于加入IL-2組和空白組(P=0.016,P=0.018),而Treg細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達(dá)量低于IL-2組(P=0.043),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;ELISA結(jié)果顯
7、示,加入IL-21后,CHB患者PBMCs培養(yǎng)上清中IL-17濃度顯著高于IL-2組和空白組(P=0.049,P=0.018),但I(xiàn)L-10及TGF-β濃度低于IL-2組(P=0.017,P=0.045),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論:
1.CHB患者外周血中存在Th17/Treg失衡,外周血清IL-21水平升高,并與Th17/Treg和Th17呈正相關(guān),提示IL-21可能是導(dǎo)致CHB患者Th17和Treg細(xì)胞比例失衡
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