MicroRNA-21參與類風濕性關節(jié)炎患者Th17-Treg細胞失衡的作用與機制.pdf

1、目的:
　　Th17細胞(T helper cell17，Th17)和調節(jié)性T細胞(regulatory cell，Treg)失衡參與類風濕性關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者的發(fā)病，但其致病機理未明。本研究探討類風濕性關節(jié)炎患者外周血單個核細胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs)中miR-21的表達與Th17/Treg平衡的關系及其調控機理。
　　方

2、法:
　　1)流式細胞技術分析RA患者及健康對照者PBMCs中Th17及Treg細胞的比例。
　　2) RA患者及健康對照者PBMCs經(jīng)PHA、LPS刺激后FlowCytomix分析細胞上清液中IL-17、IL-6、IL-1β、TNF-α、 IFN-γ、IL-22和IL-10的表達，real-time PCR檢測IL-23、IL-12p35mRNA的表達。
　　3)磁珠分選RA患者及健康對照者CD4+T細胞，real-

3、time PCR檢測PBMCs、CD4+T細胞中miR-21的表達，Spearman分析PBMCs中miR-21的表達與Th17/Treg比率的相關性。
　　4)構建高表達miR-21(LV-miR-21)及其抑制性Sponge慢病毒載體(miR-21 Sponge)，感染THP-1細胞，real-time檢測miR-21、Stat3、Stat5a、Stat5b mRNA的表達，Western blotting檢測STAT3、ST

4、AT5蛋白表達。
　　5) real-time PCR檢測RA患者及健康對照者PBMCs中Stat3、Stat5a、Stat5b、RORγt、Foxp3 mRNA的表達，Western blotting技術分析 STAT3、STAT5、p-STAT3、p-STAT5蛋白的表達;Spearman分析RA患者miR-21與Stat3、Stat5a、Stat5b mRNA表達的相關性。
　　6) LPS刺激RA患者及健康對照者PB

5、MCs，Western blotting技術檢測p-STAT3的表達，real-time PCR檢測miR-21的表達。
　　結果:
　　1)與健康對照者相比，RA患者PBMCs中Th17細胞比例顯著升高，Treg細胞比例顯著降低（均P＜0.05）。
　　2)與健康對照者相比，RA患者PBMCs經(jīng)PHA刺激后，IL-17、IL-6、IL-1β、TNF-α分泌顯著增加（均P＜0.05），IFN-γ水平顯著下降(P＜0.0

6、5)，IL-10表達無變化;RA患者的PBMCs經(jīng)LPS刺激后，IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-22分泌及IL-23、IL-12p35 mRNA的表達顯著增強（均P＜0.05），IL-10表達無變化。
　　3)與健康對照者相比，RA患者PBMCs、CD4+T細胞中miR-21的表達顯著降低（均P＜0.05），且RA患者PBMCs中miR-21的表達與其Th17/Treg細胞比率呈顯著負相關(P＜0.01)。
　　4)

7、與control組相比，THP-1細胞感染LV-miR-21慢病毒后，miR-21表達顯著升高(P＜0.001)，Stat3 mRNA表達顯著降低(P＜0.05)，STAT3蛋白表達下調，Stat5a、Stat5b mRNA表達無明顯改變，STAT5蛋白表達上調;THP-1細胞感染miR-21 Sponge慢病毒后，miR-21表達無明顯改變，Stat3 mRNA表達顯著升高（P＜0.01）STAT3蛋白表達上調，Stat5a, Sta

8、t5b mRNA表達無明顯改變，STAT5蛋白表達下調。
　　5)與健康對照者相比，RA患者PBMCs中Stat5a、Stat5b mRNA的表達顯著降低（均P＜0.05）;RA患者PBMCs中STAT3、p-STAT3的表達上調，STAT5、p-STAT5的表達下調，F(xiàn)oxp3mRNA表達顯著減少(P＜0.05);且RA患者PBMCs中miR-21表達與Stat3mRNA的表達呈顯著負相關（P＜0.05），與Stat5a、Sta

9、t5b mRNA的表達呈顯著正相關（均P＜0.01）。
　　6)RA患者及健康對照者PBMCs經(jīng)LPS刺激后，p-STAT3表達均上調，但僅健康對照者PBMCs中miR-21表達增加(P＜0.01)，RA患者PBMCs中miR-21表達減少(P＜0.05)。
　　結論:
　　1) RA患者確實存在Th17/Treg細胞失衡，RA患者Th17/Treg細胞失衡可能與IL-17、IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-22

10、、IL-23等炎性細胞因子的表達相關。
　　2)RA患者miR-21的表達與其Th17/Treg細胞失衡密切相關，且與Th17、Treg細胞發(fā)育分化關鍵轉錄因子STAT3、STAT5的表達密切相關，miR-21可能通過Stat3/stat5參與RA患者Th17/Treg細胞失衡。
　　3)正常情況下，LPS刺激誘導STAT3活化，也可促使miR-21的表達，但不能誘導RA患者miR-21的表達;因而，正常情況下，miR-21