雷帕霉素調(diào)節(jié)Th17-Treg平衡在肝纖維化中的作用機制研究.pdf

1、第一部分雷帕霉素改善四氯化碳誘導的肝纖維化
　　目的：觀察雷帕霉素對四氯化碳誘導的小鼠肝纖維化的影響
　　方法：6~8周齡雄性C57BL/6小鼠30只隨機分成正常組、模型組、治療組，每組10只。采用腹腔注射四氯化碳（CCl4）建立小鼠肝纖維化模型；其中，模型組和治療組給予腹腔注射 CCl4，雷帕霉素溶于PBS，治療組以1.25mg/kg腹腔注射，1次/d，模型組每天給予等量的PBS。治療8周后，血清行血生化檢查，肝組織行病理

2、HE染色和Masson染色觀察組織形態(tài)學變化和纖維化維程度；分別采用免疫組化檢測肝組織中轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor Beta1，TGF-β1)、α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)的表達水平。
　　結果：雷帕霉素治療組肝功能較模型組明顯好轉(zhuǎn)；病理組織學顯示雷帕霉素能明顯改善CCl4誘導的肝纖維化小鼠的肝組織結構和肝纖維化；免疫組化染色檢測顯示，與模

3、型組比較，雷帕霉素治療組肝臟組織TGF-β1和α-SMA表達均降低。結論：雷帕霉素可明顯改善CCl4誘導的肝纖維化小鼠的肝臟組織結構，減輕肝纖維化。
　　第二部分雷帕霉素抑制Th17細胞反應
　　目的：觀察雷帕霉素對肝纖維化形成過程中Th17細胞表達的影響。
　　方法：通過腹腔注射CCl4誘導小鼠肝纖維化模型，并使用雷帕霉素治療，方法及藥量同上，流式細胞術檢測Th17細胞含量的變化，以及Western Blot檢測肝內(nèi)

4、核孤兒受體（orphan nuclear hormone receptor，ROR）γt表達情況。
　　結果：經(jīng)雷帕霉素治療后，肝脾Th17細胞比例明顯比PBS治療組降低，且肝內(nèi)ROR-γt表達水平與流式細胞術檢測的結果相同。
　　結論：雷帕霉素可能抑制介導炎癥反應的Th17細胞含量，從而抑制肝纖維化進展。
　　第三部分雷帕霉素誘導調(diào)節(jié)性T細胞增殖
　　目的：探索雷帕霉素對肝纖維化調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)量和功能的影響

5、r>　　方法：通過腹腔注射CCl4誘導小鼠肝纖維化模型，給予雷帕霉素治療，方法及藥量同上，流式細胞術檢測肝脾Treg細胞含量的變化，以及Western Blot檢測肝內(nèi)Foxp3（Forkhead box p3）表達水平。體外分離雷帕霉素治療組或PBS治療組來源的Treg細胞，與CD4+CD25-調(diào)節(jié)性T細胞共培養(yǎng)，3HTdR摻入法檢測Treg細胞的免疫抑制功能；體外分離提取正常小鼠肝星狀細胞（Hepatic stellate cell

6、，HSC）分別與雷帕霉素治療組或PBS治療組來源的Treg細胞共培養(yǎng)，免疫熒光和Western blot檢測HSCs激活情況。
　　結果：雷帕霉素治療組肝脾Treg細胞比例明顯比PBS治療組升高，且肝內(nèi)Foxp3表達水平與也相應增加。同PBS治療組來源的Treg細胞比較，雷帕霉素治療組來源的Treg細胞抑制CD4+CD25-調(diào)節(jié)性T細胞增殖能力更強，以及更易抑制HSCs的激活。
　　結論：雷帕霉素不僅可促進Treg細胞增殖，