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1、目的:研究Th17細(xì)胞在博來(lái)霉素致肺纖維化小鼠中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及其作用機(jī)制,進(jìn)一步探討輔助性T細(xì)胞亞群與特發(fā)性肺纖維化的關(guān)系,并對(duì)特發(fā)性肺纖維化的發(fā)病機(jī)制有所完善。
方法:按照隨機(jī)數(shù)字表法將60只小鼠分為3組:對(duì)照組(A組)、博來(lái)霉素組(B組)和全反式維甲酸組(C組)。B、C兩組利用氣管內(nèi)一次性注入博來(lái)霉素(5 mg/kg,0.04ml)建立小鼠肺纖維化模型,A組則注入等體積的生理鹽水。C組小鼠在造模后的第0天每只腹腔注射全反式維
2、甲酸0.5mg,一周注射三次。三組小鼠在造模后的第3、7、14、28天分別各處死5只。通過(guò)HE及Masson染色評(píng)價(jià)小鼠肺組織的病理形態(tài)變化;檢測(cè)肺組織中羥脯氨酸(HYP)含量和RORγt mRNA的表達(dá)水平;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠脾臟中Th17細(xì)胞、Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化。
結(jié)果:(1)病理學(xué)變化:A組小鼠肺泡形態(tài)正常,未見(jiàn)明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),無(wú)膠原纖維增生。B組小鼠在造模后的第3、7天時(shí)肺組織以肺泡炎癥為主,第7
3、天可見(jiàn)少量膠原纖維增生;第14天炎癥有所減輕,部分肺泡融合,膠原纖維大量增生;第28天肺泡正常結(jié)構(gòu)消失,可見(jiàn)大量纖維化病灶。C3同B3,C組第7、14、28天肺泡炎、肺纖維化范圍及程度與同期B組相比,均有不同程度的緩解。
(2)與A組相比較,B、C兩組在第3、7、14及28天這四個(gè)時(shí)間點(diǎn)小鼠肺組織HYP含量逐漸升高,于第28天達(dá)最高值。其中B組第7、14、28天HYP含量都明顯高于同期A、C兩組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05
4、)。
(3)在第3、7、14及28天四個(gè)時(shí)間點(diǎn),A組RORγt mRNA表達(dá)水平均未見(jiàn)明顯變化。B組RORγt mRNA表達(dá)水平逐漸升高,于第14天達(dá)最高值,第28天有所下降,但仍高于同期A組(P<0.05)。C組RORγt mRNA表達(dá)趨勢(shì)與B組相同,但表達(dá)水平都低于同期B組,高于同期A組(P<0.05)。
(4)與A組相比較,B、C兩組Th17細(xì)胞和Th2細(xì)胞數(shù)在造模后逐漸上升,于第14天達(dá)最高值,第28天有所下
5、降,都明顯高于A組(P<0.05);而Th1細(xì)胞數(shù)逐漸下降,于第14天達(dá)最低值,第28天有所上升,都明顯低于A組(P<0.05)。C組Th17和Th2細(xì)胞數(shù)在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)都低于同期B組,而Th1細(xì)胞數(shù)則高于同期B組(P<0.05)。
結(jié)論:(1)在本次實(shí)驗(yàn)中,利用氣管內(nèi)注入博來(lái)霉素成功建立了小鼠肺纖維化的模型。
(2)在肺纖維化的過(guò)程中存在Th17/Th1/Th2細(xì)胞的失衡,Th17、Th2細(xì)胞表現(xiàn)為促纖維化作用,二者
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