Th17細(xì)胞在川崎病發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf

1、川崎病(KD)是兒童最常見(jiàn)的一種自限性的自身免疫性血管炎綜合癥,自1967年日本人首次報(bào)道川崎病以來(lái),該病在世界范圍各種族兒童中均有報(bào)道。以持續(xù)性發(fā)熱、口唇潮紅、球結(jié)合膜充血、手足硬腫脫屑等皮膚、粘膜、淋巴結(jié)的炎性癥狀為主要臨床表現(xiàn)。KD以免疫系統(tǒng)活化和血管內(nèi)皮系統(tǒng)廣泛損害為特征,主要累及全身中小動(dòng)脈,特別是冠狀動(dòng)脈,部分患兒冠脈擴(kuò)張可形成冠狀動(dòng)脈瘤,少部分患兒冠狀動(dòng)脈可發(fā)生狹窄或血栓,甚至導(dǎo)致心肌梗死。川崎病已經(jīng)超過(guò)風(fēng)濕熱成為兒童后天

2、性心臟病的首要因?yàn)?也是成人后發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷的重要因?yàn)椤?br>　　 40多年以來(lái)KD一直受到兒科學(xué)和免疫學(xué)家的高度重視,從病因,發(fā)病機(jī)制,治療,預(yù)后及干預(yù)因素等方面進(jìn)行了廣泛研究,但KD免疫發(fā)病機(jī)制迄今未完全闡明,大量流行病學(xué)及臨床觀察提示:感染因素所觸發(fā)的急性炎癥和免疫調(diào)節(jié)紊亂是KD發(fā)生冠脈病變的關(guān)鍵。已有報(bào)道多種細(xì)菌,病毒,支原體及其代謝產(chǎn)物導(dǎo)致免疫細(xì)胞,尤其是CD4+T細(xì)胞異?；罨?產(chǎn)生多種炎癥細(xì)胞因子,如:IL-6、IL-

3、8、TNF-α等在KD患兒急性期高表達(dá),特別是IL-6可能參與血管內(nèi)皮損傷,與KD患兒冠脈損害有關(guān)。在參與本病發(fā)病過(guò)程的眾多活化、升高的炎癥細(xì)胞和分子中,是否有急性炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)因素和轉(zhuǎn)歸的樞紐尚不清楚。
　　 Th17細(xì)胞足近年發(fā)現(xiàn)不同于Th1和Th2,具有產(chǎn)生白細(xì)胞介素-17(IL-17)功能的又一群CD4+輔助性T細(xì)胞亞群,具有很強(qiáng)的促炎作用。介導(dǎo)炎癥反應(yīng)(防御胞外細(xì)菌,真菌感染),參與自身免疫性疾病,移植排斥反應(yīng)和腫瘤免

4、疫過(guò)程。Th17及其產(chǎn)生的細(xì)胞因子IL-17在多種急慢性炎癥和自身免疫性疾病的調(diào)節(jié)軸中占據(jù)中心位置如:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)、炎癥性腸病等(IBD)、多發(fā)性硬化(MS)等。膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)和實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)分別作為RA和MS的動(dòng)物模型,在IL-17缺陷的小鼠中,其病情的進(jìn)展明顯緩慢。目前研究也表明RORγt是掌管Th17分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,它誘導(dǎo)編碼IL-17的基因轉(zhuǎn)錄,使初始CD4+T在IL-6和TGF-β的

5、作用下分化為Th17細(xì)胞。但有關(guān)Th17和KD急性期的炎癥關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 Treg是一類具有免疫抑制作用的T細(xì)胞亞群,有抑制自身免疫T細(xì)胞活化和維持自身免疫耐受的功能。其數(shù)量的減少或功能障礙可引起自身免疫功能紊亂。目前在多種疾病及動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)Treg數(shù)目減少,Th17數(shù)目增多,Th17/Treg失衡。但在急性期KD患兒體內(nèi)是否存在Th17/Treg失衡尚不清楚。
　　 本文探討KD患兒急性期Th17細(xì)胞、Tre

6、g數(shù)量的變化及Th17細(xì)胞相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子及細(xì)胞因子水平,旨在進(jìn)一步探討KD的免疫發(fā)病機(jī)制。
　　 目的:1、通過(guò)總結(jié)43例急性期川崎病患兒臨床病史資料進(jìn)一步了解川崎病的臨床特點(diǎn)和危害性；
　　 2、流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)KD患兒急性期外周血Th17細(xì)胞、Treg比例及IVIG后隨訪患兒Th17細(xì)胞比例,初步探討Th17細(xì)胞在川崎病(KD)發(fā)病中的作用；
　　 3、檢測(cè)Th17細(xì)胞特異的轉(zhuǎn)錄因子RORγt的表達(dá),及相關(guān)

7、細(xì)胞因子IL-6、IL-2水平,探討川崎病急性期Th17細(xì)胞增高的機(jī)制；
　　 方法:1、總結(jié)43例急性期川崎病患兒臨床病史資料；
　　 2、流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)KD患兒急性期(IVIG前)、正常體檢兒童外周血PBMC中Th17細(xì)胞,CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)占CD4+細(xì)胞的比例,及IVIG后隨訪患兒Th17細(xì)胞比例；
　　 3、熒光定量PCR檢測(cè)RORγt、IL-23p19基因mRNA

8、的表達(dá)；
　　 4、雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清IL-6水平；
　　 結(jié)果:1、43例患兒中典型川崎病37例(86％)；不典型川崎病6例(14％),所有患兒均有高熱(100％),熱程4-12天,平均熱程7.40±1.87天,其中兩例冠脈瘤患兒熱程分別為9天、10天,而不典型KD熱程并無(wú)明顯延長(zhǎng)；雙側(cè)結(jié)膜充血34例(79.1％)；唇紅、皸裂36例(83.7％)；楊梅舌23例(53.5％)；皮疹28例(65

9、.1％)；手足硬腫、指趾端脫屑34例(79.1％)；頸淋巴結(jié)腫大33例(76.7％)；冠狀動(dòng)脈有損害(CAL)者34例(79.1％),其中冠脈瘤兩例；實(shí)驗(yàn)室檢查發(fā)現(xiàn)急性期患兒白細(xì)胞總數(shù)及粒細(xì)胞增高(16.38±15.62～109/L),血沉明顯增快(44.76±27.68 mm/1 h),C反應(yīng)蛋白增高(85.07±70.44mg/L),兩例冠脈瘤患兒血沉、CRP明顯升高；在IVIG治療后這些炎性指標(biāo)顯著下降(P<0.01)；
　

10、　 2、急性期KD患兒外周血Th17細(xì)胞占CD4+細(xì)胞的比例顯著高于健康對(duì)照組[KD:(1.272±0.622)％、對(duì)照:(0.5924±0.344)％](P<0.01)；用WIG后隨訪患兒Th17細(xì)胞數(shù):(0.663±0.478),較用IVIG前顯著下降(P<0.01)；急性期KD患兒外周血CD4+CD25+FOXP3+的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)比與健康對(duì)照組比較無(wú)顯著差異[KD:(3.944±2.724)％、對(duì)照:(4.8074±

11、2.045)％](P>0.05)。
　　 3、急性期KD患兒Th17細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子RORγt的基因表達(dá)量:(M:5.62,Q:7.16),顯著高于同齡健康對(duì)照組(M:1.79,Q:2.55),(P<0.01)。IL-23p19的基因表達(dá)量:(M:2.12,Q:3.05),與正常同齡健康對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(M:1.73,Q:2.79),(P>O.05)。
　　 4、急性期KD患兒血清IL-6水平顯著增高:[病人:(M:36

12、.42,Q:129.77)、對(duì)照:(M:2.39,Q:1.15)](P<.01),且有冠脈損害患兒IL-6水平(M:66.91,Q:194.24)顯著高于無(wú)冠脈損害組(M:8.82,Q:14.73),(P<0.05)；且IL-6水平與Th17細(xì)胞比例成正相關(guān)(r=0.88 P<0.01)。
　　 結(jié)論:1、本組KD病例臨床特征:43例急性期KD患兒中包括37例典型KD,6例不典型KD；心臟彩超檢查可發(fā)現(xiàn)冠脈擴(kuò)張34例,冠脈瘤2例

13、；實(shí)驗(yàn)室檢查外周血白細(xì)胞,血沉、血小板,CRP升高,部分心肌酶譜及免疫球蛋白水平升高,尤其是冠脈瘤患兒熱程較長(zhǎng),炎性指標(biāo)明顯升高,不典型KD各項(xiàng)炎性指標(biāo)較典型者并無(wú)明顯升高；IVIG治療后,CRP、血沉、白細(xì)胞等炎性指標(biāo)明顯下降,僅血小板無(wú)明顯下降反而輕度升高。
　　 2、KD患兒Th17細(xì)胞及Treg比例:急性期KD患兒外周血Th17細(xì)胞占CD4+細(xì)胞的比例顯著高于同齡健康對(duì)照組,且在IVIG治療后下降明顯；而急性期KD患兒C

14、D4+CD25+FOXP3十的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)占CD4+細(xì)胞的比例與同齡健康組比較無(wú)顯著差異；在急性期KD患兒體內(nèi),可能不存在Th17/Treg失衡,可能是在急性炎癥的早期,Th17介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)占據(jù)了主要作用；
　　 3、轉(zhuǎn)錄因子RORγ及IL-6、IL-23p19水平:急性期KD患兒Th17細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子RORγt的表達(dá)顯著高于同齡健康對(duì)照組,其相關(guān)細(xì)胞因子IL-6也顯著升高,尤其是在有冠脈損害的患兒。且IL-6水平與