Th17細(xì)胞在銀屑病發(fā)病中的作用及意義研究.pdf

1、銀屑病是一種常見的慢性炎癥性疾病,易復(fù)發(fā),難治愈,患病率為1～3％左右,近年來銀屑病的發(fā)病率在不斷上升[1,2]。由于該病反復(fù)發(fā)作,常需反復(fù)治療,因而給患者及其家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),對(duì)患者的身體健康和精神影響甚大[3,4]。銀屑病的病因復(fù)雜,其發(fā)病機(jī)理尚不明確,目前認(rèn)為銀屑病的發(fā)病主要涉及免疫、遺傳、心理、環(huán)境因素等方面[5,6,7,8]。銀屑病的主要病理改變?yōu)榻琴|(zhì)形成細(xì)胞異常增生、角化不全、新生血管形成和炎性細(xì)胞浸潤?，F(xiàn)在普遍的觀點(diǎn)

2、為:銀屑病的發(fā)病是一種多基因遺傳多因素作用參與的T細(xì)胞免疫介導(dǎo)性皮膚病,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。其中CD4+T淋巴細(xì)胞免疫功能異常在其發(fā)病中尤為重要[7,8,9]。CD4+T淋巴細(xì)胞一直被劃分為Th1和Th2兩大類。Th1分泌IFN-γ和IL-12等細(xì)胞因子,在清除胞內(nèi)菌時(shí)起重要作用；而Th2分泌IL-4、IL-2等細(xì)胞因子,主要影響寄生蟲和胞外菌的清除,IFN-γ和IL-4分別是Thq和Th2細(xì)胞亞群標(biāo)志性細(xì)胞因子。近年來,又發(fā)現(xiàn)了一類新的C

3、D4+T細(xì)胞亞群Thq7細(xì)胞,高表達(dá)IL-17,同時(shí)也分泌IL-6和TNF-α。Th17具有獨(dú)立的分化和發(fā)育調(diào)節(jié)機(jī)制,在免疫性疾病和感染性疾病中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用,是目前的研究熱點(diǎn)之一[10,11,12,13]。IL-23主要作用于Th17細(xì)胞,維持其表達(dá),研究證實(shí)IL-23刺激Th17細(xì)胞的擴(kuò)增和維持[14,15],且Th17細(xì)胞在人體中的分化依賴于IL-1β和IL-23。故IL-23R對(duì)Th17細(xì)胞亞群來說是一個(gè)關(guān)鍵的作用因子。IL2

4、3-IL23R-TH17-IL17軸在自身免疫性疾病中的致病性已被證實(shí)。過去認(rèn)為銀屑病是Th1介導(dǎo)的免疫性疾病,伴有IFN-γ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。Austin等[23]分離出銀屑病患者皮損處T細(xì)胞,通過流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)絕大部分CD4+和CD8+細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α,而<11％的T細(xì)胞表達(dá)IL-4或IL-10,國內(nèi)何玉清等[25,26]的研究同樣發(fā)現(xiàn)了Th1細(xì)胞分化偏態(tài)性。這表明以IL-2、IFN-γ、TNF-α為代表的T

5、h1細(xì)胞因子在銀屑病發(fā)病機(jī)制中起重要作用。有研究報(bào)道Th17和強(qiáng)直性脊柱炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病的發(fā)病中起重要作用[8,15,16]。近年來Th17細(xì)胞在銀屑病發(fā)病過程中的作用越來越引起人們的重視。最近研究表明,在銀屑病皮損中可檢出白細(xì)胞介素-17(IL-17)mmNA,而非皮損處未檢出。研究結(jié)果還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損來源的大多數(shù)CD4+和CD8+T細(xì)胞表達(dá)IL-17,而與IFN-γ,IL-4的表達(dá)不相關(guān)。國內(nèi)學(xué)者也發(fā)現(xiàn)尋常型銀屑病患者

6、皮損中IL-17,IFN-γ的表達(dá)水平較正常人皮膚組織明顯增高[41]。這一結(jié)果說明銀屑病患者皮損中存在Th17細(xì)胞,并在銀屑病的發(fā)病中發(fā)揮重要作用[17]。Th17在銀屑病發(fā)病中的作用己成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)因其起效快、療效好、經(jīng)濟(jì)等因?yàn)?已被用于銀屑病治療[69]。有研究表明系統(tǒng)性應(yīng)用MTX能減少銀屑病皮損內(nèi)T細(xì)胞的數(shù)量[70]們,但對(duì)銀屑病皮損內(nèi)及血液中免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的調(diào)控作用尚

7、未清楚。且國內(nèi)外關(guān)于MTX治療銀屑病的基礎(chǔ)研究報(bào)道較少。
　　 本研究擬評(píng)價(jià)銀屑病患者的Th17細(xì)胞在外周血PBMC的表達(dá)及其與銀屑病臨床的相關(guān)性及意義,并觀察MTX治療尋常性銀屑病患者對(duì)Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的影響作用,探討MTX治療銀屑病新的作用機(jī)制。此外進(jìn)一步在中國漢族人群中鑒定與銀屑病相關(guān)的IL-23R基因的變異體區(qū)域,探討IL-23R基因多態(tài)性與漢族人銀屑病易感性的關(guān)系。
　　 第一部分:探討尋常性銀屑病患者

8、外周血中Th17細(xì)胞的變化與銀屑病臨床相關(guān)性及意義
　　 目的
　　 探討銀屑病患者的Th17細(xì)胞在外周血PBMC的表達(dá)及與其臨床相關(guān)性,初步明確Th17細(xì)胞在銀屑病發(fā)病中的作用機(jī)制及臨床意義。
　　 方法
　　 抽取43例尋常性銀屑病患者,其中進(jìn)行期為25例,靜止期18例及30例正常人對(duì)照組外周血,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血單核細(xì)胞CD4(+)IL-17(+)細(xì)胞表達(dá)水平,并分析進(jìn)行期銀屑病組和靜止期銀屑

9、病組與正常對(duì)照組差異。
　　 結(jié)果
　　 流式細(xì)胞染色示,銀屑病患者PBMC CD4(+)IL-17(+)細(xì)胞數(shù)量相對(duì)于正常人顯著性上調(diào)(t=12.057,P<0.001,),正常對(duì)照組、進(jìn)行期組、靜止期組三者有差別(F=142.34,P<0.001)。且銀屑病患者PBMC CD4(+)IL-17(+)的表達(dá)與尋常性銀屑病嚴(yán)重程度指數(shù)PASI呈顯著正相關(guān)。
　　 結(jié)論
　　 銀屑病患者外周血Th17細(xì)胞數(shù)

10、量上調(diào),Th17數(shù)量水平與尋常性銀屑病嚴(yán)重程度呈顯著性正相關(guān),Th17細(xì)胞在銀屑病的發(fā)病中可能有著重要作用,Th17細(xì)胞可能參與銀屑病的發(fā)生發(fā)展的病理生理過程。提示針對(duì)Th17的生物靶向治療也許可以作為治療銀屑病的新的有效方法。
　　 第二部分 Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子在尋常性銀屑病患者皮損及外周血清中的檢測(cè)及其臨床意義探討
　　 目的
　　 檢測(cè)尋常性銀屑病患者外周血及局部皮損組織中Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL

11、-17、IL-23的表達(dá)水平,明確銀屑病患者與正常人之間、不同期銀屑病患者之間Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的差異及其血清水平檢測(cè)的臨床意義,并觀察甲氨蝶呤(MTX)對(duì)銀屑病患者Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響,以期進(jìn)一步探討Th17細(xì)胞在銀屑病致病機(jī)理中發(fā)揮的作用及MTX治療尋常性銀屑病新的作用機(jī)制。
　　 方法
　　 尋常性銀屑病患者35例,正常人對(duì)照組30例,應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中IL

12、-17、IL-23水平；應(yīng)用巢式聚合酶鏈反應(yīng)方法(nested
　　 polymerase chain reaction)檢測(cè)皮損或皮膚組織中IL-17 mRNA、IL-23mRNA的表達(dá)水平。并動(dòng)態(tài)觀察治療前后IL-17、IL-23的變化與尋常性銀屑病患者病情活動(dòng)指標(biāo)之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果
　　 (1)尋常性銀屑病患者皮損內(nèi)IL-17mRNA、IL-23mRNA表達(dá)水平高于正常人對(duì)照組(t值分別為8.341,

13、8.748；P值分別為1.235×10-9,4.130x 10-10)。銀屑病患者經(jīng)過MTX治療8周后,皮損明顯改善,皮損內(nèi)IL-17mRNA、IL-23mRNA的表達(dá)水平低于銀屑病患者治療前的表達(dá)水平(t值分別為57.86,7.20；P值均<0.001),但與正常對(duì)照者皮膚中的表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t值分別為1.220,0.461,P值均>0.05)。
　　 (2)尋常性銀屑病患者外周血清中IL-17、IL-23的濃度較正常人

14、對(duì)照組顯著增高。IL-17、IL-23血清水平與尋常性銀屑病的分期有關(guān),其中進(jìn)行期患者組顯著高于靜止期患者組(F值分別為38.56,42.27； P值均<0.001)。經(jīng)MTX治療8周后血清中IL-17、IL-23水平均較治療前顯著下降,與正常對(duì)照者皮膚中的表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F值分別為107.76,27.21；P值<0.001)。
　　 (3)尋常性銀屑病患者皮損內(nèi)IL-17mRNA與IL-23mRNA二者的表達(dá)呈顯著正相關(guān)

15、(r=0.469,P=0.0112)。尋常性銀屑病患者IL-17、IL-23的血清濃度變化與尋常性銀屑病嚴(yán)重程度指數(shù)PASI評(píng)分有相關(guān)性(r分別為:0.732、0.611,P值分別為0.022,0.275)。而IL-17與IL-23血清濃度之間有顯著相關(guān)性(r=0.684,P=0.014)。
　　 結(jié)論
　　 (1)結(jié)果提示尋常性銀屑病患者外周血及局部皮損中Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-23的表達(dá)水平均顯著高

16、于正常對(duì)照,且進(jìn)行期患者明顯高于靜止期患者,提示Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子可能在尋常性銀屑病的發(fā)病中起重要作用,銀屑病患者外周血及局部皮損中IL-17、IL-23細(xì)胞因子水平可望作為評(píng)價(jià)銀屑病判斷病情和預(yù)后的指標(biāo)。
　　 (2)MTX能調(diào)節(jié)銀屑病患者的免疫功能,通過抑制Th17細(xì)胞的功能而發(fā)揮作用。這有可能是MTX治療銀屑病的作用機(jī)理之一。
　　 第三部分 漢族人銀屑病患者IL-23R單核苷酸多態(tài)性的研究
　　 目

17、的
　　 探討白細(xì)胞介素-23受體(IL-23R)基因多態(tài)性與中國漢族人群銀屑病易感性的關(guān)系。
　　 方法
　　 在NCBI數(shù)據(jù)庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)上檢索IL-23R的7個(gè)SNP位點(diǎn)(rs11209026、rs1004819、rs10489629、rs1343151、rs10889677、rs11209032、rs1495965)。從門診病人中收集銀屑病患者93例,正常對(duì)

18、照者108例。檢測(cè)該201例樣品中7個(gè)SNP位點(diǎn)與銀屑病易感性的關(guān)系。多態(tài)性及其單倍型與銀屑病相對(duì)危險(xiǎn)度等數(shù)據(jù)處理均采用SPSS軟件系統(tǒng)進(jìn)行。
　　 結(jié)果
　　 7個(gè)TagSNP位點(diǎn)中的4個(gè)等位基因(rs1004819、rs1343151、rs10889677、rs1495965)頻率在病例組和對(duì)照組之間的差異有顯著性(P<0.001)。
　　 結(jié)論
　　 IL23R基因多態(tài)性與漢族人銀屑病易感性有關(guān)聯(lián)。