顆粒蛋白前體在尋常型銀屑病發(fā)病中的作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　尋常型銀屑病是一種常見的慢性復發(fā)性炎癥性皮膚病，主要臨床表現(xiàn)為皮膚紅斑、斑塊上覆蓋銀白色鱗屑，主要病理特征為表皮角質形成細胞過度增殖和真皮局部炎癥細胞浸潤。雖然至今為止，尋常型銀屑病的確切病因和發(fā)病機制尚未完全闡明，但是眾所周知，腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）－α和白介素（interleukin，IL）-6在尋常型銀屑病發(fā)病中發(fā)揮著關鍵的致炎作用。
　　顆粒蛋白前體（Progr

2、anulin,PGRN）是一種多功能的分泌性生長因子，廣泛表達于多種組織，尤其是快速生長的細胞中，參與胚胎發(fā)育、組織損傷修復、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)退行性變等多種病理生理過程。近年來發(fā)現(xiàn) PGRN還是一個多功能的免疫調節(jié)分子，可通過調節(jié)免疫反應中不同的關鍵性信號通路，在炎癥性疾病中發(fā)揮抗炎或促炎作用。PGRN作為腫瘤壞死因子受體（tumor necrosis factor receptor，TNFR）的一種新配體，能通過拮抗TNF－α信號通路在

3、類風濕性關節(jié)炎模型中發(fā)揮抗炎作用。而在肥胖和胰島素抵抗性糖尿病小鼠模型中，PGRN則可以通過調節(jié)IL-6信號途徑發(fā)揮促炎作用。但是，PGRN在尋常型銀屑病中的作用至今尚不清楚。因此，本研究擬通過檢測PGRN在尋常型銀屑病病人和小鼠疾病模型中的表達，并觀察PGRN缺陷后對銀屑病樣小鼠模型的影響，從而探討PGRN在尋常型銀屑病發(fā)病中的作用及機制。
　　方法：
　　收集臨床標本：收集20例正常人的血漿和皮膚組織，以及34例臨床和組

4、織病理學檢查確認的典型進展期尋常型銀屑病患者皮損組織和治療前后的血漿，并記錄患者治療前后的銀屑病皮損面積和嚴重程度指數(shù)（Psoriasis Area and Severity Index，PASI）。
　　檢測患者皮損和血清中PGRN的表達：以免疫組織化學法和實時定量逆轉錄－聚合酶鏈反應（Quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction，q

5、RT-PCR）分別檢測正常人和尋常型銀屑病患者皮損中PGRN蛋白表達和mRNA的水平。以酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測正常人和尋常型銀屑病患者治療前后血漿中PGRN、TNF-α和IL-6的水平。
　　建立尋常型銀屑病樣小鼠模型：選擇10－12周齡的健康雄性C57BL/6小鼠，以0.01％豆蔻酰佛波醇乙酯（12-O-tetradecanoylphorbol13-

6、acetate，TPA）溶液涂抹小鼠耳部皮膚，誘導小鼠耳部皮膚發(fā)生尋常型銀屑病樣炎癥，建立尋常型銀屑病的小鼠模型。
　　檢測小鼠模型中PGRN的表達：以免疫組織化學法和qRT-PCR法分別檢測未經(jīng)處理的野生鼠和尋常型銀屑病樣小鼠耳部皮損中 PGRN蛋白和mRNA表達水平。
　　檢測PGRN的作用及對CD4＋T細胞亞群的影響：選擇10－12周齡的雄性C57BL/6遺傳背景的PGRN缺陷小鼠，以0.01％TPA溶液涂抹小鼠耳部皮

7、膚，分別從組織病理和臨床表現(xiàn)上觀察小鼠耳部皮膚發(fā)生尋常型銀屑病樣炎癥的程度，并以流式細胞術檢測TPA處理后PGRN缺陷鼠和野生鼠頸部淋巴結和耳部皮損中Th1(CD4+IFN-γ+)、Th2(CD4+IL-4+)、Th17(CD4+IL-17+)和Treg(CD4+CD25+FoxP3+)細胞的水平。
　　結果：
　　與正常皮膚組織相比，尋常型銀屑病患者皮損中PGRN的蛋白表達和mRNA的水平均有明顯升高。尋常型銀屑病患者血漿

8、中PGRN蛋白含量顯著高于正常人，且治療后患者血漿中PGRN含量明顯降低。尋常型銀屑病患者血漿中TNF-α和IL-6水平均顯著高于正常人，且血漿中TNF-α水平與 PGRN水平呈顯著正相關，但IL-6水平與PGRN水平無顯著相關性。尋常型銀屑病患者血漿中PGRN/TNF-α的比值與PASI評分呈顯著負相關。
　　野生C57BL/6小鼠經(jīng)0.01％TPA溶液涂抹耳朵后，耳部皮膚出現(xiàn)明顯的紅斑、鱗屑和增厚，組織病理表現(xiàn)出棘細胞層增厚、

9、表皮突延長、角化不全、表皮微膿腫、表皮下炎癥細胞浸潤。其臨床表現(xiàn)和組織病理均類似尋常型銀屑病病人，成功建立尋常型銀屑病小鼠模型。與未經(jīng)TPA處理的野生鼠相比較，尋常型銀屑病樣小鼠耳部皮損中PGRN蛋白表達和mRNA的水平均有明顯升高。
　　PGRN缺陷鼠經(jīng)0.01％TPA溶液涂抹耳朵后，其耳部皮膚表現(xiàn)出比野生鼠更明顯的紅斑、鱗屑和增厚，組織病理顯示表皮增厚、表皮微膿腫、真皮毛細血管增生和炎癥細胞浸潤等現(xiàn)象更嚴重。PGRN缺陷鼠的臨

10、床表現(xiàn)和組織病理均表現(xiàn)出比野生鼠更強的銀屑病樣炎癥反應。TPA處理后的PGRN缺陷鼠頸部淋巴結和耳部皮損中Treg(CD4+CD25+FoxP3+)細胞占CD4＋T細胞的比例較野生鼠明顯降低，但兩組小鼠Th1(CD4+IFN-γ+)、Th2(CD4+IL-4+)、Th17(CD4+IL-17+)細胞的比例無明顯差異。
　　結論：
　　PGRN參與了尋常型銀屑病的發(fā)病過程，且通過增加皮損和局部淋巴結中Treg細胞的數(shù)量，在尋常