顆粒蛋白前體在尋常型銀屑病發(fā)病中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　尋常型銀屑病是一種常見的慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病，主要臨床表現(xiàn)為皮膚紅斑、斑塊上覆蓋銀白色鱗屑，主要病理特征為表皮角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖和真皮局部炎癥細(xì)胞浸潤。雖然至今為止，尋常型銀屑病的確切病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，但是眾所周知，腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）－α和白介素（interleukin，IL）-6在尋常型銀屑病發(fā)病中發(fā)揮著關(guān)鍵的致炎作用。
　　顆粒蛋白前體（Progr

2、anulin,PGRN）是一種多功能的分泌性生長因子，廣泛表達(dá)于多種組織，尤其是快速生長的細(xì)胞中，參與胚胎發(fā)育、組織損傷修復(fù)、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)退行性變等多種病理生理過程。近年來發(fā)現(xiàn) PGRN還是一個(gè)多功能的免疫調(diào)節(jié)分子，可通過調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中不同的關(guān)鍵性信號(hào)通路，在炎癥性疾病中發(fā)揮抗炎或促炎作用。PGRN作為腫瘤壞死因子受體（tumor necrosis factor receptor，TNFR）的一種新配體，能通過拮抗TNF－α信號(hào)通路在

3、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中發(fā)揮抗炎作用。而在肥胖和胰島素抵抗性糖尿病小鼠模型中，PGRN則可以通過調(diào)節(jié)IL-6信號(hào)途徑發(fā)揮促炎作用。但是，PGRN在尋常型銀屑病中的作用至今尚不清楚。因此，本研究擬通過檢測(cè)PGRN在尋常型銀屑病病人和小鼠疾病模型中的表達(dá)，并觀察PGRN缺陷后對(duì)銀屑病樣小鼠模型的影響，從而探討PGRN在尋常型銀屑病發(fā)病中的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　收集臨床標(biāo)本：收集20例正常人的血漿和皮膚組織，以及34例臨床和組

4、織病理學(xué)檢查確認(rèn)的典型進(jìn)展期尋常型銀屑病患者皮損組織和治療前后的血漿，并記錄患者治療前后的銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（Psoriasis Area and Severity Index，PASI）。
　　檢測(cè)患者皮損和血清中PGRN的表達(dá)：以免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)（Quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction，q

5、RT-PCR）分別檢測(cè)正常人和尋常型銀屑病患者皮損中PGRN蛋白表達(dá)和mRNA的水平。以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)正常人和尋常型銀屑病患者治療前后血漿中PGRN、TNF-α和IL-6的水平。
　　建立尋常型銀屑病樣小鼠模型：選擇10－12周齡的健康雄性C57BL/6小鼠，以0.01％豆蔻酰佛波醇乙酯（12-O-tetradecanoylphorbol13-

6、acetate，TPA）溶液涂抹小鼠耳部皮膚，誘導(dǎo)小鼠耳部皮膚發(fā)生尋常型銀屑病樣炎癥，建立尋常型銀屑病的小鼠模型。
　　檢測(cè)小鼠模型中PGRN的表達(dá)：以免疫組織化學(xué)法和qRT-PCR法分別檢測(cè)未經(jīng)處理的野生鼠和尋常型銀屑病樣小鼠耳部皮損中 PGRN蛋白和mRNA表達(dá)水平。
　　檢測(cè)PGRN的作用及對(duì)CD4＋T細(xì)胞亞群的影響：選擇10－12周齡的雄性C57BL/6遺傳背景的PGRN缺陷小鼠，以0.01％TPA溶液涂抹小鼠耳部皮

7、膚，分別從組織病理和臨床表現(xiàn)上觀察小鼠耳部皮膚發(fā)生尋常型銀屑病樣炎癥的程度，并以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TPA處理后PGRN缺陷鼠和野生鼠頸部淋巴結(jié)和耳部皮損中Th1(CD4+IFN-γ+)、Th2(CD4+IL-4+)、Th17(CD4+IL-17+)和Treg(CD4+CD25+FoxP3+)細(xì)胞的水平。
　　結(jié)果：
　　與正常皮膚組織相比，尋常型銀屑病患者皮損中PGRN的蛋白表達(dá)和mRNA的水平均有明顯升高。尋常型銀屑病患者血漿

8、中PGRN蛋白含量顯著高于正常人，且治療后患者血漿中PGRN含量明顯降低。尋常型銀屑病患者血漿中TNF-α和IL-6水平均顯著高于正常人，且血漿中TNF-α水平與 PGRN水平呈顯著正相關(guān)，但I(xiàn)L-6水平與PGRN水平無顯著相關(guān)性。尋常型銀屑病患者血漿中PGRN/TNF-α的比值與PASI評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)。
　　野生C57BL/6小鼠經(jīng)0.01％TPA溶液涂抹耳朵后，耳部皮膚出現(xiàn)明顯的紅斑、鱗屑和增厚，組織病理表現(xiàn)出棘細(xì)胞層增厚、

9、表皮突延長、角化不全、表皮微膿腫、表皮下炎癥細(xì)胞浸潤。其臨床表現(xiàn)和組織病理均類似尋常型銀屑病病人，成功建立尋常型銀屑病小鼠模型。與未經(jīng)TPA處理的野生鼠相比較，尋常型銀屑病樣小鼠耳部皮損中PGRN蛋白表達(dá)和mRNA的水平均有明顯升高。
　　PGRN缺陷鼠經(jīng)0.01％TPA溶液涂抹耳朵后，其耳部皮膚表現(xiàn)出比野生鼠更明顯的紅斑、鱗屑和增厚，組織病理顯示表皮增厚、表皮微膿腫、真皮毛細(xì)血管增生和炎癥細(xì)胞浸潤等現(xiàn)象更嚴(yán)重。PGRN缺陷鼠的臨

10、床表現(xiàn)和組織病理均表現(xiàn)出比野生鼠更強(qiáng)的銀屑病樣炎癥反應(yīng)。TPA處理后的PGRN缺陷鼠頸部淋巴結(jié)和耳部皮損中Treg(CD4+CD25+FoxP3+)細(xì)胞占CD4＋T細(xì)胞的比例較野生鼠明顯降低，但兩組小鼠Th1(CD4+IFN-γ+)、Th2(CD4+IL-4+)、Th17(CD4+IL-17+)細(xì)胞的比例無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　PGRN參與了尋常型銀屑病的發(fā)病過程，且通過增加皮損和局部淋巴結(jié)中Treg細(xì)胞的數(shù)量，在尋常