趨化因子CCL20與Th17細胞在IgA腎病發(fā)病機制中的相互作用.pdf

1、目的：檢測趨化因子CCL20在IgAN患者的表達水平，探討其受體CCR6在外周血免疫細胞的表達，并探究他們與Th17細胞在IgAN之間的相互作用，為IgAN的發(fā)病機制提供一條新思路。
　　方法：
　　1、用IgAN患者血清與人腎小球系膜細胞孵育24小時，運用RT-PCR技術(shù)篩選出高表達的趨化因子；運用Jacalin-Agrose親和層析法提取IgAN患者血清和健康人血清中的IgA1，然后分別與腎小球系膜細胞孵育24小時，再通

2、過RT-PCR檢測兩組CCL20的mRNA表達水平；再用ELISA的方法直接檢測IgAN及健康人兩組血清中CCL20的表達水平。
　　2、通過transwell趨化實驗及流式細胞分析了解CCL20優(yōu)先趨化的細胞及其受體在哪種（哪幾種）細胞上表達水平較高。
　　3、通過胞內(nèi)因子染色實驗及細胞因子表達譜實驗檢測CCR6+細胞與Th17細胞之間的關(guān)系。
　　4、應(yīng)用免疫組化和免疫熒光技術(shù)分別檢測CCL20、T細胞及Th17細

3、胞三者在IgAN患者腎臟組織、其他腎病組織及癌旁組織的表達。
　　結(jié)果：
　　1、趨化因子CCL20在IgAN患者血清與HMC孵育后的表達上升；且無論是檢測兩組血清提取的IgA1與HMC孵育，還是單測IgAN患者和健康對照組的血清，結(jié)果均是CCL20的表達水平在IgAN患者組顯著高于健康對照組；
　　2、趨化因子CCL20優(yōu)先趨化外周血T細胞（成熟T細胞），并且其受體CCR6在成熟T細胞中表達水平及平均熒光強度都較高；

4、
　　3、CCR6+T細胞主要是分泌IL-17的Th17細胞，它們分泌炎癥因子到引起腎臟損傷或者形成免疫炎癥反應(yīng)進一步損傷；
　　4、用免疫組化法檢測在IgAN患者組織檢測到CCL20，而對照組則否；用免疫熒光法檢測到CD3+CCR6+IL-17+細胞的存在，而對照組則否。
　　結(jié)論：在IgAN中CCL20的高表達引起CCR6+T細胞（主要是Th17細胞）的高表達，Th17細胞通過分泌大量的炎癥因子和細胞因子進一步引起