CCL20-CCR6系統(tǒng)在Th17細(xì)胞介導(dǎo)的椎間盤(pán)源性腰腿痛中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的
　　腰椎間盤(pán)突出癥(lumbardischerniation，LDH)是臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病，據(jù)目前的統(tǒng)計(jì)資料表明，腰椎間盤(pán)突出癥患者約占因腰腿痛就診患者的15％，美國(guó)每年約有570萬(wàn)人忠有此癥，其中40％被診斷為腰椎間盤(pán)突出癥，隨著人們生活節(jié)奏的加快，腰椎間盤(pán)突出癥的發(fā)病率呈逐年增高的趨勢(shì)，由于椎間盤(pán)突出所致的疼痛更是影響患者生活質(zhì)量的重要因素。因此，充分了解椎間盤(pán)突出癥疼痛的病理生理機(jī)制，尋找導(dǎo)致椎間盤(pán)突出引起腰腿疼痛的致

2、病因素，對(duì)于探索最有效、最適當(dāng)?shù)闹委煵呗?，改善臨床治療效果具有重要意義。
　　方法
　　選擇2012年4月～2012年7月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院骨外科住院并經(jīng)影像學(xué)檢查和臨床表現(xiàn)確診的腰椎間盤(pán)突出癥患者。50例患椎間盤(pán)突出癥病人的椎間盤(pán)組織以及3例脊柱外傷病人的椎間盤(pán)組織，根據(jù)影像學(xué)檢查和臨床表現(xiàn)分為突出組(GroupP，n=20)、脫出組(GroupE，n=30)和正常對(duì)照組(NormalControl，n=3)。用免疫組織化

3、學(xué)及免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)檢測(cè)退變椎間盤(pán)組織中CCL20、TNF-α、Th17細(xì)胞（CD4+IL-17A+和CD4+CCR6+）等的表達(dá);8例患椎間盤(pán)突出癥病人的髓核組織用于髓核細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)髓核細(xì)胞時(shí)在上清液中加入Th17相關(guān)細(xì)胞因子（IL-17A和TNF-α），收集上清液用ELISA法檢測(cè)CCL20蛋白的濃度，收集髓核細(xì)胞用RT-PCR法檢測(cè)CCL20mRNA的表達(dá)水平;另外收集20例患椎間盤(pán)突出癥病人術(shù)前、術(shù)后的外周血標(biāo)本和15例正常健

4、康人的外周血標(biāo)本用來(lái)做流式細(xì)胞儀檢測(cè)，流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)外周血中Th17細(xì)胞所占的比例以及Th17細(xì)胞表面CCR6的陽(yáng)性率，ELISA檢測(cè)血清中IL-17的濃度，術(shù)前、術(shù)后Th17、IL-17、VAS評(píng)分及其變化做相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果
　　1.免疫組織化學(xué)染色顯示在突出組和脫出組的椎間盤(pán)組織中CCL20、TNF-α的表達(dá)較對(duì)照組顯著提高并存在顯著性差異(p＜0.001);免疫熒光雙標(biāo)染色結(jié)果顯示僅在脫出組椎間盤(pán)組織中檢

5、測(cè)到Th17細(xì)胞的表達(dá)，而在突出組和正常對(duì)照組未檢測(cè)到。
　　2.Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子（IL-17和TNF-α）能顯著提高髓核細(xì)胞分泌CCL20的能力，并且存在明顯的劑量依從性。
　　3.流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)結(jié)果示，在病人外周血中，與對(duì)照組相比，Th17細(xì)胞的表達(dá)(1.039±0.156％vs.2.973±0.689％，P＜0.0001)及其表面CCR6的陽(yáng)性率(28.75±2.09％vs.59.69±4.48％，P＜0.

6、0001)均有顯著提高。
　　4.相關(guān)性分析結(jié)果示，術(shù)前、術(shù)后Th17、IL-17、VAS評(píng)分以及手術(shù)前后其變化值之間存在顯著相關(guān)性:術(shù)前（Th17vs.IL-17，r=0.723，p＜0.01;Th17vs.VAS，r=0.805，p＜0.01;IL-17vs.VAS，r=0.675，p＜0.01）、術(shù)后（分別為r=0.551，p＜0.01;r=0.536，p＜0.01;r=0.507，p＜0.01）、手術(shù)前后變化值(分別為r=

7、0.729,p＜0.01;r=0.732,p＜0.01;r=0.536,p＜0.01)。
　　結(jié)論
　　CCL20/CCR6系統(tǒng)在Th17細(xì)胞被趨化至退變的椎間盤(pán)組織中起重要作用，Th17細(xì)胞被趨化到局部后，其細(xì)胞因子促進(jìn)退變的髓核細(xì)胞分泌CCL20，通過(guò)CCL20/CCR6系統(tǒng)趨化更多的Th17細(xì)胞至退變椎間盤(pán)，如此便形成了一個(gè)正反饋環(huán)路，趨化至局部的Th17細(xì)胞能分泌大量炎性細(xì)胞因子并促進(jìn)其他炎癥細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子，在