CCL20-CCR6在實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎中的表達(dá)及抗CCL20治療的研究.pdf

1、目的：⑴研究趨化因子CCL20及其受體CCR6在惡唑酮誘導(dǎo)的小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎中的表達(dá)。⑵研究CCL20單抗在小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎中的療效并探討其作用機(jī)制。 方法：健康昆明小鼠60只分為6組：正常組(N組)、模型組(M組)、生理鹽水組、SASP組(S組)、單抗組（D組）、聯(lián)合給藥組（DS組）。除正常組外，其余小鼠均以惡唑酮灌腸造模。造模后第二天起，生理鹽水組使用生理鹽水腹腔注射（0.1ml/只/天*4天）；SASP組使用SASP灌胃（

2、200mg/kg/天*4天）；單抗組使用CCL20單抗腹腔注射（1mg/kg/天*4天）；聯(lián)合給藥組使用CCL20單抗腹腔注射（1mg/kg/天*4天）及SASP灌胃（200mg/kg/天*4天）。然后處死小鼠，觀察炎癥評(píng)價(jià)指標(biāo)(DAI、大體、組織學(xué)損傷評(píng)分、MPO值)；采用熒光定量PCR法檢測各組腸粘膜CCL20、NF-κB、TNF-α、IL-4、IL-1βmRNA的表達(dá)量；采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測各組結(jié)腸組織中CCL2

3、0的蛋白水平；分離腸粘膜固有層單個(gè)核細(xì)胞（LPMC），采用流式細(xì)胞儀測定分析CCR6陽性的CD4+T、CD8+T、B淋巴細(xì)胞數(shù)量。 結(jié)果：①與正常組相比，模型組中腸粘膜CCL20mRNA、NF-κBmRNA、TNF-αmRNA、IL-4mRNA、IL-1βmRNA、CCL20的蛋白水平，LPMC中 CCR6陽性的CD4+T、CD8+T、B淋巴細(xì)胞數(shù)量均明顯升高(P<0.05)。②模型組相比，單抗組DAI評(píng)分、大體形態(tài)與組織學(xué)損傷

4、評(píng)分、MPO活性明顯下降(P<0.05)；CCL20mRNA、CCL20的蛋白水平、CCR6陽性的CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯下降(P<0.05)；結(jié)腸粘膜NF-κBmRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA、IL-4 mRNA的表達(dá)量也明顯下降(P<0.05)。③與單抗組相比，SASP組DAI評(píng)分、大體形態(tài)評(píng)分、MPO活性均無明顯區(qū)別，僅組織學(xué)損傷評(píng)分下降程度超過單抗組(P<0.05)，且結(jié)腸粘膜NF-κBmRNA、IL-1βmR

5、NA、IL-4 mRNA的表達(dá)量下降程度超過單抗組(P<0.05)，但是單抗組CCR6陽性的CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量下降比SASP組更明顯(P<0.05)；④與單抗組及SASP組相比，聯(lián)合給藥組DAI評(píng)分、大體形態(tài)與組織學(xué)損傷評(píng)分均下降更明顯(P<0.05)，結(jié)腸粘膜NF-κBmRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA、IL-4 mRNA的表達(dá)量與SASP組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但NF-κBmRNA、IL-1βmRNA、