CC型趨化因子CCL20及其受體CCR6在早期硬皮病皮損中的表達及意義.pdf

1、目的：探究CC型趨化因子CCL20及其受體CCR6在早期硬皮病患者皮損中的表達，研究CCL20/CCR6是否參與硬皮病的發(fā)生和發(fā)展。
　　 方法：
　　 一．免疫組織化學及熒光定量PCR分別檢測早期硬皮病患者皮損中CC型趨化因子CCL20及其受體CCR6蛋白及mRNA的表達。
　　 二．采用組織塊培養(yǎng)法分別分離硬皮病患者及正常人真皮成纖維細胞，以含10％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基進行體外原代培養(yǎng)。通過形態(tài)學及免疫細胞

2、化學的方法對其進行鑒定，MTT法測細胞的增殖。分別用不同濃度的Th1及Th2細胞因子進行處理，在不同的時間點分別取上清行ELISA，細胞mRNA作實時定量PCR檢測。
　　 三．檢測成纖維細胞產(chǎn)生的CCL20的趨化活性，并比較硬皮病成纖維細胞和正常成纖維細胞所產(chǎn)生的CCL20的趨化活性是否有差異。
　　 結(jié)果：
　　 一．CCL20及其受體CCR6蛋白及mRNA在早期硬皮病皮損中的表達增加，而且二者在皮損中的分布

3、部位一致。
　　 二．體外原代培養(yǎng)的皮膚成纖維細胞可快速穩(wěn)定增殖。硬皮病患者真皮成纖維細胞和正常人真皮成纖維細胞在形態(tài)學和免疫細胞化學上無明顯差異?；A狀態(tài)下，CCL20 mRNA及蛋白質(zhì)在兩種細胞中均很低，但在硬皮病患者真皮成纖維細胞表達水平較正常人真皮成纖維細胞高；Th1型細胞因子(TNF-αand IL-1β)能夠隨劑量和時間的增加顯著提高成纖維細胞CCL20的表達水平；相反，硬皮病患者真皮成纖維細胞CCL20的表達水平則

4、隨Th2型細胞因子(IL-4)濃度和時間的增加而降低。
　　 三．重組型及成纖維細胞上清中的CCL20對PBMCs的趨化功能呈濃度依賴性。兩種成纖維細胞上清的CCL20較重組型CCL20對PBMCs具有更強的趨化活性；硬皮病患者真皮成纖維細胞上清中的CCL20的趨化活性較正常皮膚成纖維細胞高；CCL20抗體能完全阻斷重組型CCL20的趨化活性，但對硬皮病患者成纖維細胞上清PBMCs的趨化活性僅能阻斷43.98±10.48％。