Th17細(xì)胞與Il-17在TON中的作用及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 1.建立SD大鼠外傷性視神經(jīng)病變動物模型，觀察SD大鼠外傷性視神經(jīng)病變后Th17細(xì)胞(Th17lymphocytes)及IL-17(interleukin-17)的變化趨勢。
　　 2.探討Th17細(xì)胞和IL-17在外傷性視神經(jīng)病變中的作用，為治療外傷性視神經(jīng)病變提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.采用液壓沖擊顱腦損傷儀建立外傷性視神經(jīng)病變動物模型，將70只4周齡健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為

2、3組:正常組10只，假傷對照組10只和實(shí)驗(yàn)組50只，實(shí)驗(yàn)組分為5個亞組（1d、3d、7d、14d、28d，每組10只）。實(shí)驗(yàn)組大鼠用液壓顱腦損傷儀(FPI)建立外傷性視神經(jīng)病變模型;假傷對照組大鼠除不進(jìn)行打擊外，余處理同實(shí)驗(yàn)組;正常組大鼠不進(jìn)行任何處理。
　　 2.分別在造模后1、3、7、14、28天對正常組、假傷對照組和相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)行閃光視覺誘發(fā)電位(F-VEP)檢查，取大鼠脾臟制備脾單細(xì)胞懸液進(jìn)行Th17細(xì)胞的流式細(xì)胞學(xué)

3、計(jì)數(shù)，制作大鼠眼球標(biāo)本進(jìn)行IL-17免疫組化染色，提取視神經(jīng)蛋白應(yīng)用蛋白免疫印跡(Westernblot)檢測視神經(jīng)中IL-17蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.閃光視覺誘發(fā)電位結(jié)果顯示:各組大鼠均可引出典型的NPN波形。與正常組相比較假傷對照組大鼠的隱含值稍升高，振幅稍降低，但與正常組比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.219,P=0.829;t=-0.218,P=0.830);與假傷對照組相比較各實(shí)驗(yàn)組大鼠的隱含值從損

4、傷后開始上升，到14d左右開始穩(wěn)定，而振幅正相反，從損傷后開始下降，到14d左右開始穩(wěn)定，與假傷對照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.769,3.171,7.503,10.278,12.264,P＜0.05;t=3.413,5.979,7.291,9.352,10.070，P＜0.05)。
　　 2.流式細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果顯示:與正常組相比較假傷對照組大鼠的脾臟單細(xì)胞懸液中，Th17細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例稍增高，但與正常組比較沒有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義(t=-0.241，P=0.813);與假傷對照組相比較各實(shí)驗(yàn)組Th17細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例從損傷后開始上升，損傷后7d達(dá)到高峰，然后開始下降，但28d時仍高于假傷對照組。與假傷對照組相比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12.244，13.659,18.302,19.813,13.938;P＜0.05)。
　　 3.IL-17免疫組化結(jié)果顯示:與正常組相比較假傷對照大鼠組視網(wǎng)膜中IL-17陽性表達(dá)稍增多，但與正常組比較

6、沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.537，P=0.496);與假傷對照組相比較各實(shí)驗(yàn)組大鼠視網(wǎng)膜中IL-17陽性表達(dá)從損傷后開始上升，損傷后7d達(dá)到高峰，然后開始下降，但28d時仍高于假傷對照組。與假傷對照組相比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.253，5.219，7.974，9.528，7.441;P＜0.05)。
　　 4.WesternBlot檢測結(jié)果顯示:與正常組相比較假傷對照組大鼠視神經(jīng)中IL-17蛋白表達(dá)稍增高，但與正常組比較

7、沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.405，P=0.690);與假傷對照組相比較各實(shí)驗(yàn)組大鼠視神經(jīng)中IL-17蛋白表達(dá)從損傷后開始上升，損傷后7d達(dá)到高峰，然后開始下降，但28d時仍高于假傷對照組。與假傷對照組相比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.342，7.469，9.737，10.484，8.946;P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.實(shí)驗(yàn)組大鼠的隱含值從損傷后開始上升，而振幅從損傷后開始下降，并均在14d左右開始穩(wěn)定，這

8、些改變符合臨床上視神經(jīng)外傷后的電生理檢查變化特征，表明用FPI可以成功造成外傷性視神經(jīng)病變。
　　 2.假傷對照組大鼠脾臟單細(xì)胞懸液中Th17細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例、IL-17免疫組化及IL-17蛋白的表達(dá)與正常組相比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明除打擊外的操作對Th17細(xì)胞及IL-17的表達(dá)沒有影響。
　　 3.實(shí)驗(yàn)組大鼠脾臟單細(xì)胞懸液中Th17細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例、IL-17免疫組化及IL-17蛋白的表達(dá)與假傷