嵌合豬圓環(huán)病毒的構(gòu)建及其對仔豬的免疫原性.pdf

1、豬圓環(huán)病毒（PCV ）具有PCV1和PCV2 兩種基因型，PCV1 沒有致病性，PCV2 則可引起豬斷奶后多系統(tǒng)消耗綜合征等疾病。本研究通過克隆PCV1 全基因組序列，構(gòu)建出PCV1 感染性DNA 克??；通過構(gòu)建嵌合PCV（PCV1-2 ）感染性DNA 克隆，獲得生物純PCV1-2，并通過仔豬接種試驗分析了PCV1-2 對仔豬的免疫原性。
　　 用PCR 技術(shù)擴增與克隆出1 株P(guān)CV1 全基因組，命名為BJ-1 株。全基因組序列

2、結(jié)果顯示該株與其它PCV1分離株的核苷酸同源性為99.4%，主要開放閱讀框（ORF ）序列結(jié)果顯示其核苷酸同源性在92.7%以上。雖然各個PCV1分離株之間的全基因組與主要ORF的核苷酸同源性均很高，但仍然呈現(xiàn)出一定的地域相關(guān)性。
　　 將PCV1 全基因組克隆入載體pBluescript Ⅱsk（+），構(gòu)建出PCV1 DNA 克隆，將其轉(zhuǎn)染PK-15細胞系后獲得拯救病毒PCV1。將拯救PCV1 在PK-15 細胞系連續(xù)培養(yǎng)5代

3、后，其TCID50 達到10 6.55 /mL，顯示出較高的感染滴度。
　　 用反向PCR 技術(shù)缺失掉PCV1 ORF2，并替換入PCV2 ORF2，構(gòu)建出嵌合豬圓環(huán)病毒（PCV1-2 ）DNA 克隆，將其轉(zhuǎn)染PK-15 細胞系后獲得生物純PCV1-2。將PCV1-2 在PK-15 細胞系連續(xù)培養(yǎng)5代后，其TCID50 達到10 6.05 /mL，表明獲得了具有較高感染滴度的PCV1-2。
　　 將PCV1-2 接種35

4、 日齡健康仔豬，觀察仔豬的臨床變化，用ELISA 方法測定血清中PCV2 ORF2抗體，用常規(guī)和熒光定量PCR 技術(shù)測定血清與組織中PCV1-2 DNA含量。結(jié)果顯示，仔豬接種PCV1-2后未出現(xiàn)可見的臨床癥狀和大體病理變化，仔豬增重和飼料轉(zhuǎn)化效率未受影響；血清中PCV2 ORF2抗體在接種后第14 d 出現(xiàn)陽轉(zhuǎn)，第28 d 時抗體陽性率達到100%，表明PCV1-2 對仔豬具有良好的免疫原性；血清中PCV1-2 DNA含量在接種后逐漸