惡性瘧原蟲重組蛋白HGXPRT免疫原性及免疫保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：探討在畢赤酵母中表達(dá)的惡性瘧原蟲(HN株)重組蛋白次黃嘌呤—鳥嘌呤—黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Hypoxanthine-Guanine-Xanthine，HGXPRT)免疫應(yīng)答特性和免疫保護(hù)作用。 材料和方法：對可能含有目的蛋白的樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析(WesternBlotAnalysis)；通過高效液相層析系統(tǒng)對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化；分別以ISA720和FREUND為佐劑，惡性瘧原蟲重組蛋白HGXPRT經(jīng)后腿皮下免疫BALB/

2、c小鼠3次，間隔3wk；每次免疫后第十天經(jīng)尾靜脈采血，通過ELISA檢測免疫血清中的特異性抗體；以間接免疫熒光實驗(IFA)分析免疫血清對惡性瘧原蟲天然抗原的識別情況；并于第三次免疫后10天經(jīng)腹腔對小鼠攻擊感染105約氏瘧原蟲致死株；攻擊感染后每隔24小時觀察小鼠血液中原蟲率的動態(tài)變化。 結(jié)果：通過高效液相層析系統(tǒng)對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化，表達(dá)產(chǎn)物純度達(dá)到90﹪以上；佐劑加HGXPRT給小鼠免疫后均誘導(dǎo)出針對抗原HGXPRT體液免疫應(yīng)

3、答，3次免疫后血清中特異性抗體滴度達(dá)到105以上；HGXPRT所誘導(dǎo)的血清能識別惡性瘧原蟲天然抗原；用約氏瘧原蟲致死株攻擊感染后第四天各組平均原蟲率有顯著差異(F檢驗，P＜0.01)，攻擊感染后第三天、第四天、第五天以ISA720為佐劑的實驗組小鼠平均原蟲率明顯低于對照組和空白組的平均原蟲率(T檢驗，P＜0.01)；以FREUND為佐劑的實驗組小鼠平均原蟲率亦明顯低于對照組(T檢驗，P＜0.01)。 結(jié)論：在畢赤酵母菌中表達(dá)的惡