惡性瘧原蟲頂端膜抗原蛋白胞外域在家蠶桿狀病毒表面的展示及其免疫原性初步研究.pdf

1、惡性瘧原蟲項端膜抗原蛋白(Plasmodium falciparum apical membrane antigen1,PfAMA1)是理想的紅內(nèi)期瘧疾疫苗候選抗原,其胞外域具有良好的免疫原性,可誘導機體產(chǎn)生中和抗體,用于瘧疾疫苗的制備。
　　 家蠶生物反應(yīng)器表達外源蛋白具有生產(chǎn)成本低、天然性好、不含熱原、安全性好等優(yōu)點。桿狀病毒表面展示系統(tǒng)做為一種新的真核表達系統(tǒng),通過在桿狀病毒囊膜蛋白gp64中插入外源蛋白,將外源蛋白展示在

2、重組桿狀病毒表面,通過純化的重組桿狀病毒可以做為疫苗原用于疫苗生產(chǎn),相比傳統(tǒng)疫苗具有產(chǎn)量高、易于操作、適用于大規(guī)模生產(chǎn)的特點。
　　 本文嘗試利用家蠶生物反應(yīng)器制備惡性瘧原蟲PfAMA1胞外域抗原蛋白以及通過桿狀病毒表面展示技術(shù)將PfAMA1胞外域蛋白展示于BmNPV表面以研究其用于制備瘧疾疫苗的可行性。首先,我們原核表達了惡性瘧原蟲PfAMA1胞外域蛋白,親和層析純化后免疫新西蘭雄兔獲得檢測抗體。然后,利用家蠶Bac-to-B

3、ac系統(tǒng)在家蠶蛹中高效表達了PfAMA1胞外域蛋白。通過勻漿、分級離心、超濾和親和層析等方法純化重組蛋白,獲得的重組蛋白含量高達126.5 mg/kg蠶蛹,將重組蛋白免疫新西蘭雄兔,經(jīng)檢測表明其抗血清對原核表達的PfAMA1胞外域蛋白具有專一性的特異性。進一步地,我們構(gòu)建了融合BmNPVgp64信號肽和跨膜區(qū)的pFastBacl-gp64-AMA1轉(zhuǎn)移載體,利用Bac-to-Bac系統(tǒng)獲得了重組桿狀病毒BmNPV-gp64-AMA1。接