新型乙肝表面抗原中蛋白核酸疫苗在中國(guó)獼猴體內(nèi)免疫原性初步研究.pdf

1、背景和目的：慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是一個(gè)世界性的公共衛(wèi)生問(wèn)題，并且可導(dǎo)致肝硬化及肝細(xì)胞肝癌等嚴(yán)重疾病。目前的抗病毒治療方案不能有效地清除乙肝病毒cccDNA，無(wú)法達(dá)到徹底治愈的目標(biāo)。近年來(lái)研究表明，各種免疫治療新方法能有效誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，對(duì)慢性HBV感染具有治療作用，其中核酸疫苗是最具有前景的治療慢性HBV感染的方法之一，特別是其誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞免疫反應(yīng)對(duì)HBV的清除至關(guān)重要。 本研究小組既往已在

2、小鼠模型證實(shí)新型乙肝表面抗原中蛋白核酸疫苗pSW3891/MHBs具有很好的體液和細(xì)胞免疫原性。在核酸疫苗進(jìn)入臨床試驗(yàn)前，進(jìn)一步了解其在大動(dòng)物體內(nèi)的免疫原性和安全性是很必要的。獼猴在種屬起源、免疫系統(tǒng)等方面與人類最為接近，是許多疾病可靠的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停彩撬幬锱R床前試驗(yàn)常選用的大動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。因此，本研究選擇中國(guó)獼猴作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以進(jìn)一步觀察新型核酸疫苗pSW3891/MHBs在中國(guó)獼猴體內(nèi)的安全性及免疫原性，為將來(lái)臨床應(yīng)用奠定良好的基礎(chǔ)。

3、 方法：實(shí)驗(yàn)選用成年中國(guó)獼猴4只(6-7歲)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各2只(每組雌雄各1只)，分別在第0、8、16、24、48周肌肉注射核酸疫苗(pSW3891/MHBs)或?qū)φ蛰d體(pSW3891)，用ELISA法檢測(cè)中國(guó)獼猴血清抗-HBs，CFSE-PI染色FCM法測(cè)定中國(guó)獼猴外周血淋巴細(xì)胞HBsAg特異性增殖反應(yīng)，ELISPOT法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞特異性分泌IFN-γ的細(xì)胞頻數(shù)。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組中國(guó)獼猴血清抗-HBs滴度在

4、72周達(dá)到最高峰，最高滴度分別為1∶6400和1∶12800，對(duì)照組抗-HBs滴度始終為陰性(＜1∶50)；實(shí)驗(yàn)組中國(guó)獼猴外周血淋巴細(xì)胞HBsAg特異性增殖反應(yīng)明顯增強(qiáng)，細(xì)胞分裂指數(shù)分別為18.64和14.70，而對(duì)照組細(xì)胞分裂指數(shù)分別為1.62和2.61，實(shí)驗(yàn)組外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌IFN-γ的特異性細(xì)胞頻數(shù)分別為90/106PBMCs和50/106PBMCs，對(duì)照組沒(méi)有檢測(cè)到分泌的IFN-γ特異性細(xì)胞。 結(jié)論：本研究證明，新型