乙肝表面抗原DNA疫苗初免—蛋白疫苗加強(qiáng)免疫策略增強(qiáng)免疫反應(yīng)的蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、DNA初免-蛋白質(zhì)加強(qiáng)的免疫策略已經(jīng)廣泛應(yīng)用以增強(qiáng)這兩種疫苗的免疫原性，但是這種免疫增效的機(jī)制目前還不清楚。我們以pVAX1質(zhì)粒為載體構(gòu)建了表達(dá)乙肝表面抗原的真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX-S，用pVAX-S和重組乙肝表面抗原以C57BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)施了DDD、DDS、SSS和SSD4種不同的免疫策略。在第一次免疫后第3周、7周、11周、15周、19周和23周用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)了這些小鼠的總抗體滴度，第11周用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)了不同

2、免疫組小鼠的T細(xì)胞免疫記憶強(qiáng)度和樹(shù)突狀細(xì)胞刺激T細(xì)胞增殖的能力，第23周用RocheAssayMedium分光法按效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞1：50的比例檢測(cè)了CTL活性。我們觀察到DDS組小鼠擁有最強(qiáng)的免疫記憶，無(wú)論抗體滴度、CTL活性、T細(xì)胞免疫記憶強(qiáng)度還是樹(shù)突狀細(xì)胞激活T細(xì)胞的能力都比其它免疫組以及空白對(duì)照組的小鼠更強(qiáng)。我們進(jìn)一步進(jìn)行了比較血清蛋白質(zhì)組學(xué)的研究，以期能闡明這種免疫增效作用的機(jī)制。以非免疫組小鼠作參照膠，我們發(fā)現(xiàn)DDS組小鼠有

3、5個(gè)蛋白上調(diào)、17個(gè)蛋白下調(diào)；而SSS組小鼠則有7個(gè)蛋白上調(diào)、10個(gè)蛋白下調(diào)。在DDS組中唯一出現(xiàn)的3個(gè)蛋白質(zhì)periplakin、F-boxprotein30和calpain的生理功能都和免疫反應(yīng)有一定的關(guān)系。這3個(gè)蛋白可以作為潛在的成功免疫的新型分子標(biāo)記物，也可能成為疫苗作用機(jī)制的新研究目標(biāo)。在我們的一個(gè)在研項(xiàng)目中，我們用豬帶絳蟲(chóng)囊尾蚴抗原膜聯(lián)蛋白B1DNA疫苗和蛋白質(zhì)疫苗對(duì)小鼠進(jìn)行免疫后分析其血清蛋白質(zhì)組，初步得到6個(gè)特異性表達(dá)蛋