AMM亞單位疫苗加強(qiáng)BCG初免的不同免疫程序的研究.pdf

1、結(jié)核病是傳染病中繼艾滋病之后的第二大殺手，目前成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題?？ń槊?BCG)作為目前世界上許多國家唯一批準(zhǔn)應(yīng)用于人體的抗結(jié)核疫苗已經(jīng)用了80多年了，然而在不同地區(qū)的人群中，BCG對青少年和成人的保護(hù)效果有明顯的差異，BCG對成人結(jié)核病效果甚微。因此，探索新的疫苗免疫策略是控制結(jié)核病的重要手段。目前，亞單位蛋白疫苗是最有發(fā)展前景的新型疫苗之一，在小鼠等動物模型中，用這類疫苗強(qiáng)化免疫BCG初免可以誘導(dǎo)出較好的免疫保護(hù)效應(yīng)。

2、　　 經(jīng)研究證實，融合蛋白Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4(AMM)和佐劑二甲基三十六烷基銨(DDA)、卡介苗多糖核酸(BCG PSN)構(gòu)建的亞單位疫苗較為理想，強(qiáng)化BCG初始免疫能夠誘導(dǎo)出強(qiáng)的免疫保護(hù)效應(yīng)。然而，強(qiáng)化免疫策略的免疫程序還有待研究。
　　 目的：本研究用AMM、DDA、BCG PSN構(gòu)建的亞單位疫苗強(qiáng)化BCG初始免疫，對免疫接種次數(shù)及時間不同對小鼠模型免疫效應(yīng)和保護(hù)效應(yīng)的影響進(jìn)行比較研究，以便

3、獲得一個具有最佳免疫保護(hù)效應(yīng)的免疫接種程序。
　　 方法：1.BCG初免，AMM亞單位疫苗10周后強(qiáng)化免疫一次或8、10周強(qiáng)化免疫兩次的免疫效應(yīng)比較。將AMM、DDA和BCG PSN混合構(gòu)建AMM亞單位疫苗。實驗組1：BCG初免后第10周用AMM亞單位疫苗加強(qiáng)免疫小鼠一次；實
　　 驗組2：BCG初免后于第8、10周分別用AMM亞單位疫苗加強(qiáng)免疫。設(shè)立生理鹽水和僅BCG免疫兩個對照組。BCG初免后第14、22周，用ELI

4、SPOT、ELISA技術(shù)檢測小鼠的細(xì)胞及體液免疫反應(yīng)，第22周用BCG活菌模擬攻擊被免疫小鼠，26周用流式細(xì)胞術(shù)和ELISA技術(shù)檢測T細(xì)胞分型及體液免疫反應(yīng)。2.BCG初免，AMM亞單位疫苗10周后強(qiáng)化免疫一次、8、10周強(qiáng)化免疫兩次和6、8、10周強(qiáng)化免疫三次的免疫效應(yīng)和保護(hù)效應(yīng)比較。實驗組1、2免疫程序同上述，另增加實驗組3：BCG初免后于第6、8、10周分別用AMM亞單位疫苗加強(qiáng)免疫。設(shè)立PBS及僅BCG免疫兩個對照組。BCG初免

5、后第14周應(yīng)用ELISPOT、ELISA技術(shù)檢測免疫小鼠的細(xì)胞及體液免疫反應(yīng)。第22周用H37Rv毒株攻擊被免疫小鼠，間隔6周后檢測小鼠體內(nèi)結(jié)核菌載量，分析組織病理切片。
　　 結(jié)果：1.AMM亞單位疫苗8、10周加強(qiáng)免疫兩次誘導(dǎo)分泌IFN-γ的能力強(qiáng)于10周時加強(qiáng)免疫一次；加強(qiáng)免疫兩次組的IgG1抗體滴度明顯高于加強(qiáng)免疫一次組，而作為反映Th1型免疫反應(yīng)指標(biāo)的IgG2a/IgG1比值，強(qiáng)化免疫兩次組低于強(qiáng)化一次組；BCG模擬攻

6、擊被免疫小鼠后，加強(qiáng)免疫一次或兩次組的CD4+CD25+T細(xì)胞含量均高于僅BCG免疫組。2.AMM亞單位疫苗8、10周加強(qiáng)免疫兩次誘導(dǎo)分泌IFN-γ的能力強(qiáng)于加強(qiáng)免疫一次和三次；IgG1抗體滴度與加強(qiáng)次數(shù)成正比，IgG2a抗體水平與加強(qiáng)次數(shù)關(guān)系不大，強(qiáng)化的次數(shù)越多，反映Th1型免疫反應(yīng)的IgG2a/IgG1比值越??；加強(qiáng)免疫兩次比一次和三次對抗結(jié)核菌的能力強(qiáng)，細(xì)菌載量最少；組織切片觀察得出AMM亞單位疫苗加強(qiáng)BCG沒有加重小鼠臟器的病理