牛新孢子蟲亞單位疫苗的研究.pdf

1、新孢子蟲病(Neosporiasis)是由犬新孢子蟲(Neospora caninum)寄生于犬、牛、馬、羊等多種宿主動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)而引起的一種原蟲病。新孢子蟲病是多種家畜共患的一種原蟲病，該病對牛的危害尤為嚴(yán)重。目前，還沒有防制新孢子蟲病的有效措施，一般認(rèn)為疫苗免疫是預(yù)防牛流產(chǎn)和降低經(jīng)濟(jì)損失的可行性措施，因此，開發(fā)新疫苗已成為該領(lǐng)域研究熱點(diǎn)。
　　本試驗(yàn)通過體外培養(yǎng)新孢子蟲，并采用液氮-水浴反復(fù)凍融及超聲波裂解蟲體，經(jīng)葡聚糖凝膠層析

2、分離純化出多種可溶性抗原，將分離純化的可溶性抗原經(jīng)SDS-PAGE分析蛋白分子量大約為43KDa、36KDa和33KDa，分別與新孢子蟲兩種表面抗原和一種致密顆?？乖鄬?yīng)，經(jīng)Western-blotting分析，所分離的抗原蛋白均具有反應(yīng)原性。將純化蛋白濃縮合并分別輔以Cp-M、IMS1313和Polygen三種佐劑及PBS免疫沙鼠，測定沙鼠的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，以評價(jià)疫苗的免疫效果。
　　應(yīng)用IFAT對免疫后沙鼠每周抗體效

3、價(jià)進(jìn)行測定，結(jié)果顯示，三個(gè)佐劑組的抗體效價(jià)均高于PBS組，其中Cp-M組效價(jià)最高，從二免后第二周起PBS組與三個(gè)佐劑組抗體效價(jià)均差異極顯著(P＜0.01)，最高抗體效價(jià)可達(dá)1:1600，攻毒后，各組抗體效價(jià)均顯著上升，Cp-M組最高可達(dá)1:3200。
　　免疫沙鼠的細(xì)胞免疫測定分別采用檢測T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+百分含量及淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)進(jìn)行評估。結(jié)果顯示，疫苗Cp-M組、IMS1313組、Polygen組和PBS組的CD

4、4+細(xì)胞含量均高于對照組，Cp-M組、IMS1313組和Polygen組與對照組均差異極顯著（P＜0.01）。四種疫苗組的CD8+細(xì)胞含量均高于對照組，Cp-M組、IMS1313組與對照組差異極顯著（P＜0.01），四種疫苗組的CD4+/CD8+值均高于對照組，Cp-M組與對照組差異極顯著（P＜0.01）。疫苗Cp-M組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率明顯高于對照組，差異顯著（P＜0.05）。
　　攻毒試驗(yàn)后經(jīng)計(jì)算得出疫苗保護(hù)率分別為，Cp-M組7