新孢子蟲表面蛋白基因DNA疫苗的研究.pdf

1、犬新孢子蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲，主要引起奶牛流產(chǎn)、死胎等一系列繁殖障礙和犬的神經(jīng)系統(tǒng)疾患。造成畜牧業(yè)特別是奶牛業(yè)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，目前治療該病沒有特效藥物，所以防治該病寄希望于疫苗的研究。 新孢子蟲的表面抗原SAG1和SRS2在入侵宿主細(xì)胞時(shí)起著非常重要的作用，并能引起宿主的免疫應(yīng)答。目前對(duì)這兩個(gè)基因免疫作用的研究比較多，證明他們能有效地引起宿主產(chǎn)生保護(hù)性反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)室前期工作中已經(jīng)成功地構(gòu)建了這兩個(gè)基因的融合基因，并在大腸桿

2、菌中成功地進(jìn)行了表達(dá)，該融合基因表達(dá)的蛋白能引起小鼠很強(qiáng)的細(xì)胞免疫。證明該融合基因有一定的研究價(jià)值。 本研究是在前期研究工作的基礎(chǔ)上，將NcSAG1基因和NcSAG1-NcSRS2融合基因分別插入到真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)中，成功構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-SAG1和pcDNA-SAG1-SRS2。應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將二者導(dǎo)入COS-7培養(yǎng)細(xì)胞中，用間接免疫熒光試驗(yàn)，檢測(cè)蛋白的表達(dá)，顯示這兩個(gè)質(zhì)粒均在細(xì)胞中表達(dá)出蛋

3、白。將兩質(zhì)粒分別分成高(300μg/只)、中(200μg/只)和低(100μg/只)三個(gè)劑量免疫小鼠，并設(shè)不加佐劑的低劑量對(duì)照和陰性對(duì)照。來研究不同劑量質(zhì)粒誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)的免疫反應(yīng)效果。通過ELISA和淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)，檢測(cè)構(gòu)建的這兩個(gè)真核表達(dá)質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)引起的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。 結(jié)果顯示，構(gòu)建的核酸疫苗pcDNA-SAG1和pcDNA-SAG1-SRS2都能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，并且左旋咪唑佐劑能對(duì)免疫反應(yīng)