奶牛新孢子蟲病分子生物學(xué)檢測(cè)方法的研究.pdf

1、目的：新孢子蟲?。∟eosporosis）是由犬新孢子蟲（Neospora caninum）寄生在宿主體內(nèi)所引起的一種多種動(dòng)物共患的血液原蟲病。該病不僅對(duì)狗等動(dòng)物造成危害，對(duì)牛的危害尤為嚴(yán)重，現(xiàn)已確證，它是世界上許多地區(qū)造成奶牛流產(chǎn)、產(chǎn)弱胎、死胎和木乃伊胎的主要原因之一。目前，還沒有能夠預(yù)防治療新孢子蟲病的有效藥物和疫苗，故對(duì)該病的早期檢測(cè)是有效防控該病的重要手段。
　　方法：本研究根據(jù)GenBank上發(fā)表的牛新孢子蟲NcSAG1

2、基因、Nc5基因、NcSRS2基因和牛性腺（prolactin）基因設(shè)計(jì)四對(duì)特異性引物，以NcSAG1基因、Nc5基因和NcSRS2基因作為目的基因?qū)εＰ骆咦酉x進(jìn)行檢測(cè)，以牛性腺基因擴(kuò)增的片段作為內(nèi)標(biāo)對(duì)反應(yīng)過程進(jìn)行監(jiān)測(cè)，建立了含內(nèi)標(biāo)監(jiān)控物的新孢子蟲病多重PCR檢測(cè)方法；根據(jù)GenBank上發(fā)表的牛新孢子蟲Nc5基因序列和弓形蟲GRA6基因序列，設(shè)計(jì)合成兩對(duì)特異性引物和兩條熒光探針，建立了同時(shí)檢測(cè)新孢子蟲病和弓形蟲病的雙重?zé)晒舛縋CR檢

3、測(cè)方法；根據(jù)新孢子蟲NcSAG1基因、Nc5基因、NcSRS2基因、牛性腺基因和弓形蟲GRA6基因，設(shè)計(jì)合成相應(yīng)的五對(duì)特異性引物和五條芯片寡核苷酸探針，將各自的標(biāo)有熒光染料的PCR產(chǎn)物變性后與芯片上的寡核苷酸探針雜交，建立了以牛性腺基因?yàn)閮?nèi)標(biāo)、弓形蟲GRA6基因?yàn)閷?duì)照的新孢子蟲病多基因芯片檢測(cè)方法。
　　結(jié)果：本研究成功地建立了新孢子蟲病的三種分子生物學(xué)檢測(cè)方法。
　　結(jié)論：試驗(yàn)表明，這三種方法均具有良好的特異性、敏感性和重