乙肝疫苗免疫不應(yīng)答群體的蛋白組和microRNA組表達(dá)差異性研究.pdf

1、全球有超過20億人感染過乙肝病毒。乙肝疫苗接種是預(yù)防乙肝的最有效方法，但仍有5％-10％的人群，對(duì)于乙肝疫苗免疫后不能有效的產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。目前對(duì)于乙肝免疫不應(yīng)答機(jī)理的研究主要集中在免疫系統(tǒng)缺陷和MHC多態(tài)性等方面，但尚無血漿蛋白組學(xué)相關(guān)研究報(bào)道。實(shí)際上，血漿/血清是最復(fù)雜的人類蛋白組，包含了不同組織的亞蛋白組，能夠動(dòng)態(tài)的反映個(gè)體的整體生理狀態(tài)。在臨床上，血漿/血清的檢測(cè)作為一種非侵入性的檢測(cè)方法得到普遍應(yīng)用。并發(fā)展出了多種重要疾病的

2、檢測(cè)指標(biāo)。血漿蛋白組及miRNAs組相關(guān)的疾病檢測(cè)標(biāo)記研究已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。
　　在本課題中，為了研究乙肝不應(yīng)答人群的血漿蛋白組差異，找到不應(yīng)答相關(guān)的分子標(biāo)記，我們共采集高應(yīng)答、無應(yīng)答人群血漿各54例，正常對(duì)照人群血漿21例作為樣本。使用MARS多重親和柱去除血漿中14種高豐度蛋白后，進(jìn)行熒光差異雙向電泳實(shí)驗(yàn)，差異蛋白點(diǎn)經(jīng)質(zhì)譜分析，鑒定到維生素D結(jié)合蛋白(VDBP)、α1微球蛋白、Afamin、抗凝血酶-Ⅲ、激肽原(KNG1)、α

3、1-抗糜蛋白酶、纖鏈蛋白(VN)，共7個(gè)差異蛋白。經(jīng)過Western blot、ELISA驗(yàn)證以及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(P＜0.05)，α1微球蛋白、激肽原(KNG1)在無應(yīng)答人群血漿中含量高于應(yīng)答人群，α1-抗糜蛋白酶則在高應(yīng)答人群血漿含量中更高。
　　在血清miRNAs組學(xué)研究部分中，我們共收集到新鮮血清樣本:高應(yīng)答39例、無應(yīng)答44例、正常對(duì)照22例。通過芯片技術(shù)進(jìn)行大規(guī)模miRNAs掃描，在高應(yīng)答、無應(yīng)答組之間已初步確定了12個(gè)差異

4、，二者和正常對(duì)照組相比共計(jì)37個(gè)差異。
　　另外，為了進(jìn)一步研究HBV病毒和宿主之間的相互作用，探究HBV-X基因?qū)λ拗骷?xì)胞蛋白組的影響，我們使用實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的可調(diào)控表達(dá)HBV-X基因的HepG2細(xì)胞株，進(jìn)行雙向電泳實(shí)驗(yàn)，在使用Dox誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)的兩組間共找到10個(gè)具有顯著差異的蛋白。
　　我們的研究中，首次對(duì)乙肝免疫高應(yīng)答、無應(yīng)答人群的血漿/血清進(jìn)行了蛋白組和miRNAs組的差異研究，發(fā)現(xiàn)了3種差異蛋白和12個(gè)潛在的差異