真姬茹高溫脅迫應答的蛋白組學差異表達分析.pdf

1、真姬菇(Hypsizygusmarmoreus）是一種珍稀食用菌品種，以其豐富的營養(yǎng)價值和廣泛的藥用價值深受人們的喜愛。真姬菇屬于中偏低溫型食用菌，溫度過高或過低都會對真姬菇的生產(chǎn)造成較大影響。
　　 本研究以真姬菇品種白真姬菇G12為材料，采用了傳統(tǒng)的TCA/丙酮法、Tris-飽和酚法及尿素裂解法提取真姬菇菌絲全蛋白，確定了Tris-飽和酚法是一種高效的真姬菇菌絲全蛋白提取方法，所提取蛋白完整性好，產(chǎn)量高，雜質少，適用于后續(xù)蛋

2、白質組學的研究。
　　 以真姬菇最適生長溫度25℃正常培養(yǎng)三周為正常組，以25℃正常培養(yǎng)三周并高溫42℃熱激2h為處理組，建立適于真姬菇菌絲全蛋白的雙向電泳體系，即采用24cm，pH4-7的IPG膠條，蛋白上樣量為1.2mg，上樣體積為480μL，被動水化時間16h。IEF程序為:100V1h;500V1h;1000V1h;8000V3h，8000V7h。SDS-PAGE的電泳條件為2W40min，17W6.5h。染色方法為膠體

3、考染過夜。通過雙向電泳技術研究比較正常組和處理組之間的蛋白質組差異。利用軟件識別蛋白點并獲得關于差異蛋白點的分子量、等電點和相對表達豐度的信息，以及凝膠間蛋白點的匹配和定量分析信息。蛋白質表達量差異倍數(shù)在3.0以上的12個蛋白差異點，其中4個蛋白點在處理組中表達量上調(diào)，8個蛋白點下調(diào)。將蛋白質表達量差異倍數(shù)在3.0以上的12個蛋白差異點進行MALDI-TOF-TOF-MS初步鑒定和數(shù)據(jù)庫檢索，進行功能預測及分析，有7個蛋白有質譜信號，數(shù)

4、據(jù)庫搜索之后4個蛋白得到初步鑒定，3個蛋白為未知蛋白及預測蛋白。還有5個電腦識別的差異蛋白質由于分辨率或靈敏度不夠，或者因匹配率覆蓋率太低未得到鑒定，因而未能進一步分析。
　　 這些差異蛋白大致歸為6個主要的功能類群，包括:(1)糖類和能量代謝(2)參與基因表達調(diào)控(3)蛋白質代謝(4)細胞骨架動態(tài)變化(5)參與信號轉導途徑(6)脅迫反應，此外還有轉錄調(diào)控相關、離子運輸、氨基酸代謝、核酸代謝、其它功能和未知功能蛋白質。表達量上調(diào)