真姬茹高溫脅迫應(yīng)答的蛋白組學(xué)差異表達(dá)分析.pdf

1、真姬菇(Hypsizygusmarmoreus）是一種珍稀食用菌品種，以其豐富的營養(yǎng)價(jià)值和廣泛的藥用價(jià)值深受人們的喜愛。真姬菇屬于中偏低溫型食用菌，溫度過高或過低都會對真姬菇的生產(chǎn)造成較大影響。
　　 本研究以真姬菇品種白真姬菇G12為材料，采用了傳統(tǒng)的TCA/丙酮法、Tris-飽和酚法及尿素裂解法提取真姬菇菌絲全蛋白，確定了Tris-飽和酚法是一種高效的真姬菇菌絲全蛋白提取方法，所提取蛋白完整性好，產(chǎn)量高，雜質(zhì)少，適用于后續(xù)蛋

2、白質(zhì)組學(xué)的研究。
　　 以真姬菇最適生長溫度25℃正常培養(yǎng)三周為正常組，以25℃正常培養(yǎng)三周并高溫42℃熱激2h為處理組，建立適于真姬菇菌絲全蛋白的雙向電泳體系，即采用24cm，pH4-7的IPG膠條，蛋白上樣量為1.2mg，上樣體積為480μL，被動(dòng)水化時(shí)間16h。IEF程序?yàn)?100V1h;500V1h;1000V1h;8000V3h，8000V7h。SDS-PAGE的電泳條件為2W40min，17W6.5h。染色方法為膠體

3、考染過夜。通過雙向電泳技術(shù)研究比較正常組和處理組之間的蛋白質(zhì)組差異。利用軟件識別蛋白點(diǎn)并獲得關(guān)于差異蛋白點(diǎn)的分子量、等電點(diǎn)和相對表達(dá)豐度的信息，以及凝膠間蛋白點(diǎn)的匹配和定量分析信息。蛋白質(zhì)表達(dá)量差異倍數(shù)在3.0以上的12個(gè)蛋白差異點(diǎn)，其中4個(gè)蛋白點(diǎn)在處理組中表達(dá)量上調(diào)，8個(gè)蛋白點(diǎn)下調(diào)。將蛋白質(zhì)表達(dá)量差異倍數(shù)在3.0以上的12個(gè)蛋白差異點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-TOF-MS初步鑒定和數(shù)據(jù)庫檢索，進(jìn)行功能預(yù)測及分析，有7個(gè)蛋白有質(zhì)譜信號，數(shù)

4、據(jù)庫搜索之后4個(gè)蛋白得到初步鑒定，3個(gè)蛋白為未知蛋白及預(yù)測蛋白。還有5個(gè)電腦識別的差異蛋白質(zhì)由于分辨率或靈敏度不夠，或者因匹配率覆蓋率太低未得到鑒定，因而未能進(jìn)一步分析。
　　 這些差異蛋白大致歸為6個(gè)主要的功能類群，包括:(1)糖類和能量代謝(2)參與基因表達(dá)調(diào)控(3)蛋白質(zhì)代謝(4)細(xì)胞骨架動(dòng)態(tài)變化(5)參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(6)脅迫反應(yīng)，此外還有轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)、離子運(yùn)輸、氨基酸代謝、核酸代謝、其它功能和未知功能蛋白質(zhì)。表達(dá)量上調(diào)