鹽脅迫下大頭典竹差異蛋白組學(xué)的研究.pdf

1、高鹽濃度的土壤不利于大多植被的生長，而大頭典竹作為我國東南沿海成功引種的樹種之一，在當(dāng)?shù)乇憩F(xiàn)出較強(qiáng)的適應(yīng)性，研究其耐鹽機(jī)制尤為重要。以2年生的大頭典竹為試驗(yàn)材料，對盆栽的大頭典竹進(jìn)行正常的澆水處理和濃度為0.4％、0.6%的NaCl鹽溶液處理。試驗(yàn)經(jīng)優(yōu)化后的大頭典竹雙向電泳技術(shù)，獲得鹽脅迫前后蛋白差異表達(dá)譜，質(zhì)譜鑒定確定差異蛋白的信息功能，為充分認(rèn)識(shí)植物的耐鹽機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴試驗(yàn)比對了TCA丙酮法、T

2、ris-酚抽法、三氯乙酸-丙酮法與酚抽結(jié)合法三種不同蛋白提取方法的凝膠圖譜效果，同時(shí)還從膠條水化運(yùn)行方式、等點(diǎn)聚焦程序(IEF)參數(shù)設(shè)置、蛋白上樣量幾個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)化，獲得適用于大頭典竹的雙向電泳體系：采用三氯乙酸-丙酮法與酚抽結(jié)合法提取葉片蛋白，17 cm pH5-8 IPG膠條在等電聚焦程序參數(shù)為65000 VH條件下，采用膠面向上、被動(dòng)水化24 h的運(yùn)行方式，蛋白上樣量為50μL，獲得的凝膠圖譜重復(fù)性好，分辨率高。⑵利用優(yōu)化后的適合

3、大頭典竹的雙向電泳體系，獲得鹽脅迫前后的凝膠圖譜蛋白點(diǎn)均為600個(gè)左右。經(jīng)PDQuest8.0.1蛋白軟件分析，獲得在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有意義的差異蛋白點(diǎn)。在0.4%鹽濃度脅迫下，得到34個(gè)顯著的差異蛋白（12個(gè)蛋白上調(diào)，22個(gè)蛋白下調(diào)）。在0.6%鹽濃度脅迫下，得到的差異蛋白有40個(gè)。⑶共挑選18個(gè)差異的蛋白質(zhì)譜鑒定分析，成功鑒定15個(gè)。其中，在0.4%和0.6%鹽濃度脅迫下，放氧增強(qiáng)子蛋白1、放氧增強(qiáng)子蛋白3、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶、

4、磷酸甘油酸激酶的表達(dá)量隨著鹽濃度的升高而增加。谷氨酰胺合成酶、抗壞血酸過氧化物酶2的表達(dá)量均表現(xiàn)上調(diào)。ATP合酶β亞基、ATP合酶的表達(dá)量均表現(xiàn)顯著下調(diào)，ATP合酶α亞基表達(dá)量呈現(xiàn)先上調(diào)后下調(diào)的趨勢。⑷對15個(gè)差異蛋白進(jìn)行GO（Gene Ontology）注釋和KEGG分析，大多數(shù)差異蛋白位于細(xì)胞部位，主要參與了細(xì)胞過程和代謝過程，以離子結(jié)合功能、轉(zhuǎn)運(yùn)活性功能、催化活性功能為主。其主要涉及到光合作用代謝通路（4個(gè)），氧化磷酸化代謝通路（