食管癌相關(guān)蛋白的差異蛋白組學(xué)研究.pdf

1、目的：食管癌是我國常見的惡性腫瘤之一，盡管在食管癌的基礎(chǔ)和臨床醫(yī)療方面進(jìn)行了大量的研究，但由于食管癌早期無明顯癥狀，臨床上診斷的食管癌大多已處于晚期，目前食管癌的整體治療效果仍不理想。本研究采用蛋白組學(xué)這種高通量的研究方法對食管鱗癌組織和正常食管粘膜組織中蛋白質(zhì)表達(dá)的情況進(jìn)行比較研究，以期篩選和鑒定出與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的蛋白并闡明食管鱗癌的致病機(jī)理，找到食管鱗癌的早期診斷、合理的綜合治療以及預(yù)后評判等相關(guān)的分子標(biāo)志物，發(fā)現(xiàn)食管鱗癌生

2、物靶向治療的新靶點(diǎn)。
　　材料與方法：采用雙向凝膠電泳/結(jié)合基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜(2-DE/MALDI-TOF)的方法對8對食管鱗癌組織和正常食管組織進(jìn)行比較研究。采用Image Master2D Platimum Version5.0軟件用來進(jìn)行蛋白質(zhì)的找點(diǎn)、定量和匹配及統(tǒng)計(jì)分析，認(rèn)為百分比灰度(％Volume)大于1.5倍且具有重復(fù)性時被認(rèn)為是差異點(diǎn)。運(yùn)用一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜混合搜庫模式搜索NCBI數(shù)據(jù)庫。搜索結(jié)果

3、中肽指紋圖譜鑒定結(jié)果得分大于54分，一級和二級聯(lián)合鑒定可信度大于95％，認(rèn)為鑒定結(jié)果可信。通過MASCOT檢索確定蛋白名稱基礎(chǔ)上，對于部分蛋白在組織標(biāo)本中進(jìn)行蛋白表達(dá)情況的驗(yàn)證工作。最后在差異蛋白驗(yàn)證的基礎(chǔ)上，對具有潛在意義的目標(biāo)蛋白在大樣本的食管鱗癌組織中進(jìn)行臨床病理的研究。采用組織芯片結(jié)合免疫組化的方法研究目標(biāo)蛋白的表達(dá)狀況與腫瘤的臨床病理參數(shù)以及預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：第一部分蛋白組學(xué)通過雙向凝膠電泳實(shí)驗(yàn)總共發(fā)現(xiàn)有42個差異

4、蛋白點(diǎn)，其中在食管鱗癌組織中表達(dá)量上調(diào)的點(diǎn)有18個，在正常組織中表達(dá)量上調(diào)的蛋白點(diǎn)有24個。經(jīng)過質(zhì)譜鑒定出27個差異蛋白，其中在食管癌腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)的有12個蛋白分別是：ANXA1、SERPIN B5、TTR、TXN、APOA1、TPI1、SERPINB3、TPT11、PPIA、PFN1、CYTB、LGALS7：在食管癌組織中表達(dá)下調(diào)的有15個蛋白分別是：TPM2、TPM3、MYL1、MYL3、APCS、MYL6、MYL2、MB、C

5、RYAB、TAGLN、PEBP1、CA1、CA3、CKM、ALDOA。第二部分對Galectin-7(LGALS7)，PEBP以及CyclophilinA(PPIA)這三個差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在免疫印跡和免疫組化試驗(yàn)中Galectin-7和CyclophilinA在食管癌中表達(dá)高于正常食管粘膜組織，而PEBP在食管癌中的表達(dá)低于正常食管粘膜組織。第三部分，對cyclophilinA的表達(dá)情況采用組織芯片結(jié)合免疫組化的方法在大樣本的

6、食管癌臨床標(biāo)本中進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示Cyclophilin A在腫瘤組織中的高表達(dá)率為70.3％，而在正常食管組織中的高表達(dá)率為40.7％，Cyclophilin A在腫瘤組織中的高表達(dá)率明顯高于正常食管組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Cyclophilin A的表達(dá)情況與食管癌患者的年齡、性別、腫瘤的部位、腫瘤的分化程度以及腫瘤的局部侵潤程度無關(guān)。區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中cyclophilinA的高表達(dá)率(79.5％)高于無

7、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(64.9％)，但兩者的差別尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.091)。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示cyclophilinA的表達(dá)程度與食管鱗癌患者的預(yù)后相關(guān)。CyclophilinA高表達(dá)的患者總體生存率較差，但差異尚未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0588)。在無瘤生存期方面cyclophilinA的高表達(dá)者預(yù)后明顯差于低表達(dá)者(P=0.0427)。
　　結(jié)論：雙向凝膠電泳/結(jié)合基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜可