幾種舌苔蛋白組學(xué)初步研究.pdf

1、目的：舌診是指導(dǎo)中醫(yī)辨證論治的重要診斷依據(jù)，舌苔是臨床察舌的主要內(nèi)容。舌苔原理及其客觀化研究是中醫(yī)現(xiàn)代化基礎(chǔ)研究中的一個(gè)重大關(guān)鍵性課題，伴隨人類基因組計(jì)劃的完成，人類對(duì)生命本質(zhì)與疾病的研究進(jìn)人了后基因組時(shí)代。功能基因組和蛋白質(zhì)組學(xué)是現(xiàn)代生命科學(xué)的最重要的前沿領(lǐng)域。本研究在多年研究成果的基礎(chǔ)上，運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，基于分子整體水平開展舌苔原理的微觀辨證學(xué)研究，探討舌苔蛋白質(zhì)組及中醫(yī)證候之間的相互關(guān)系，探索舌苔與證候的分子生物學(xué)事件。

2、 方法：將觀察對(duì)象根據(jù)有無(wú)各系統(tǒng)器質(zhì)性疾病及舌苔表現(xiàn)，分為正常薄白苔、病理薄苔、厚苔、剝苔組，每例用刮勺用力刮取舌苔后離心、洗滌。以固相pH梯度等電聚焦為第一向、垂直SDS-PAGE為第二向的雙向電泳技術(shù)中的關(guān)鍵因素與環(huán)節(jié)，如樣品處理、上樣量、電泳參數(shù)、凝膠濃度和SOS凝膠電泳染色方法等進(jìn)行了研究和實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化。并對(duì)其四組舌苔組織的蛋白質(zhì)組進(jìn)行分離，銀染顯色，凝膠掃描入計(jì)算機(jī)，ImagoMaster 2D Platinum軟件分析比

3、較電泳圖譜；選擇36個(gè)差異點(diǎn)切下，膠內(nèi)胰酶消化后，進(jìn)行質(zhì)譜(MALDL-TOF-Ms)ImageMaster 2D Platinum軟件分析獲得的二維凝膠圖像。 結(jié)果：建立并優(yōu)化了舌苔蛋白質(zhì)組雙向電泳技術(shù)，建立了舌苔蛋白質(zhì)組研究圖像分析體系，獲得了分辨率和重復(fù)性均較好的舌苔蛋白質(zhì)組雙向電泳銀染圖譜。在此基礎(chǔ)上對(duì)四組舌苔組織的蛋白質(zhì)組進(jìn)行分離分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)凝膠中可檢測(cè)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)分別為1082±105個(gè)、1052±85個(gè)、112

4、9±98個(gè)、1143±140個(gè)。篩選出具有明顯表達(dá)差異的36個(gè)斑點(diǎn)，對(duì)其36個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行了肽質(zhì)指紋的質(zhì)譜分析鑒定，軟件對(duì)比分析確立了36種明顯差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，并初步確定了其等電點(diǎn)和分子量。對(duì)其中3個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行了肽質(zhì)指紋的質(zhì)譜分析鑒定，查詢NCBI蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，初步鑒定了該3個(gè)蛋白質(zhì)分別為cytokeratin 13、GAL7 protein和cystatin B。 所鑒定出的蛋白質(zhì)有可能與與病理舌苔的發(fā)生、發(fā)展有