合并梗阻性黃疸的膽管癌膽汁蛋白組學(xué)研究.pdf

1、目的:膽管癌(Cholangiocarcinoma，CC)是起源于膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，惡性程度高，對放化療不敏感，預(yù)后極差，五年生存率接近于零。近些年其發(fā)病率呈顯著的上升趨勢。手術(shù)根治性切除是目前臨床治療膽管癌唯一有效的治療手段，但是由于膽管癌起病隱匿，目前影像等檢測手段的限制，大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已無法進(jìn)行手術(shù)根治性切除，因此早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷對改善膽管癌的預(yù)后極其重要。本研究的目的是通過蛋白質(zhì)組學(xué)等手段篩選出人膽汁中的潛在的膽管癌生

2、物分子標(biāo)志物，并驗(yàn)證其相應(yīng)在膽管癌中的診斷效力。
　　方法:本研究收集臨床上合并梗阻性黃疸的膽管癌及膽石癥患者膽汁，采用高效反向液相色譜(RPLC)以及液質(zhì)離子阱質(zhì)譜儀(LC-MS/MS)技術(shù)相結(jié)合構(gòu)建完成了人的膽汁的差異蛋白質(zhì)表達(dá)譜。進(jìn)一步采用STRING數(shù)據(jù)庫對這些差異蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析并結(jié)合目前的研究進(jìn)展，挑選出LCN1和PTTG1IP作為潛在的分子標(biāo)志物，通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測LCN1和PTTG1IP在C

3、C、膽石癥患者膽汁中的表達(dá)水平，評估其作為新標(biāo)志物的診斷價(jià)值，并從細(xì)胞水平采用免疫印跡法(Western blotting)對這兩個(gè)差異蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行了驗(yàn)證和分析。
　　結(jié)果:通過RPLC-MS/MS檢測出了1985種蛋白質(zhì)，共發(fā)現(xiàn)了285個(gè)差異蛋白質(zhì)，其中198個(gè)是在CC患者的膽汁中明顯高表達(dá)，87個(gè)蛋白質(zhì)在CC患者膽汁中低表達(dá)。緊接著我們結(jié)合目前的差異蛋白質(zhì)的研究方面查詢相關(guān)信息后，我們通過數(shù)據(jù)庫結(jié)合目前的研究進(jìn)展從中挑選

4、了LCN1和PTTG1IP兩個(gè)蛋白質(zhì)，并且我們利用ELISA對LCN1和PTTG1IP在CC、膽石癥膽汁中的表達(dá)水平進(jìn)行了定量分析，結(jié)果提示LCN1和PTTG1IP能很好的將膽管癌和膽石癥病人區(qū)分開，其敏感度和特異度分別為80％，92％和60％，92％。同時(shí)，利用膽管癌細(xì)胞及其正常膽管上皮細(xì)胞樣本進(jìn)行的免疫印跡的結(jié)果也顯示這兩個(gè)蛋白在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)要顯著高于正常細(xì)胞。LCN1和PTTG1IP這兩個(gè)標(biāo)志物在膽管癌的診斷中明顯優(yōu)于CA19